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专利名称：一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法及应用

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202211134793.7

专利申请（专利权）人：山东理工大学
权利人地址：山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室

专利发明（设计）人：李月云,刘海艇,李悦源,王淑君,徐振

专利摘要：本发明属于新型纳米材料、免疫分析和生物传感检测技术领域，提供了一种富氧空位锌锰双金属氧化物免疫传感器的制备方法及应用。本发明首次将富氧空位的鲁米诺锰酸锌复合材料作为基底材料产生光信号并应用于电化学发光免疫传感器的构建中，利用氧空位吸附更多溶解氧从而产生超氧自由基，促进了鲁米诺发光现象，从而放大了电化学发光信号。利用聚多巴胺的醌类单元猝灭了鲁米诺电化学发光信号，进而实现了对心肌肌钙蛋白Ⅰ的定量、灵敏检测。本发明的电化学发光免疫传感器操作简便，成本低，灵敏度高，检测范围广，对心肌肌钙蛋白Ⅰ的定量、灵敏检测有重要的科学意义和应用价值。

主权利要求：
1.一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将直径为3.0～5.0mm的玻碳电极用氧化铝抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；
(2)取5.0μL、0.5～5.0mg/mL的Lu@Ov?ZMO分散液滴加到电极表面，室温条件下自然晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；
(3)继续将6.0μL、5.0～15.0μg/mL的心肌肌钙蛋白I抗体滴加到电极表面，4℃冰箱中干燥；
(4)继续将3.0μL、1.0～2.0wt％的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH＝6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；
(5)滴加6.0μL、0.02pg/mL～200ng/mL的一系列不同浓度的心肌肌钙蛋白I抗原溶液，pH＝6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；
(6)将6.0μL、3.0～8.0mg/mL的检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液滴涂于电极表面，静置于4℃冰箱中30～40min，用pH＝6.98的磷酸盐缓冲液冲洗，置于4℃冰箱中晾干，制得一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器。
2.如权利要求1所述的一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，所述Lu@Ov?ZMO分散液的制备，步骤如下：(1)Ov?ZMO的制备
将1.05g聚乙烯吡咯烷酮，2.17g二水合醋酸锌和4.95g四水合醋酸锰依次分散在100mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液A；将6.0～6.5g异烟酸溶解在60mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液B；随后将溶液A加入溶液B并加热至140℃保持24h，冷却后离心分离，用体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰?1胺洗涤沉淀三次，在80℃真空干燥后，置于管式炉中，以2℃·min 的速率升温至500～700?1℃保持2h；冷却后继续在氮气流中以2℃·min 的速率升温至700℃保持2h，制得Ov?ZMO；
(2)Lu@Ov?ZMO的制备
将5.0mL5.0～10.0mmol/L的鲁米诺溶液溶解于10mL0.1mol/L氢氧化钠溶液中，继续加入20mL5.0～10.0mg/mL的Ov?ZMO溶液，室温下搅拌6h，后在7000r/min下离心3min，所得沉淀50℃干燥2h，制得Lu@Ov?ZMO；
将0.5～5.0mgLu@Ov?ZMO超声分散于1.0mL超纯水中，制得Lu@Ov?ZMO分散液，备用。
3.如权利要求1所述的一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，所述检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液的制备，步骤如下：(1)SiO2的制备
将1.5mL正戊醇、30mL环己烷和2.7mL10～15mmol/L四乙氯硅酸盐连续搅拌形成溶液A；将1.5～2.0g十六烷基三甲基溴化铵和0.6g尿素加入30mL超纯水中形成溶液B；将溶液B快速加入溶液A中并搅拌0.5h，将混合液转移到50mL高压釜中，120℃加热4h，冷却至室温后?1依次用丙酮和超纯水离心洗涤三次并收集沉淀，真空干燥，以1℃·min 的速率升温至550℃保持6～8h，制得SiO2；
(2)SiO2@PDA的制备
将0.05～0.10g多巴胺溶解在30mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中，向溶液中加入0.05～0.10gSiO2，室温下连续搅拌20h，后在7000r/min离心5min，50℃真空干燥后，制得SiO2@PDA；
(3)检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液的制备
将1.0～3.0mL2.0mg/mL的SiO2@PDA溶液加入到1.0mL10μg/mL的检测抗体Ab2溶液中，
4℃恒温振荡箱中震荡孵化12h；离心洗涤后，重新分散至1.0～3.0mL的pH＝6.98的磷酸缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液，4℃保存备用。
4.一种如权利要求1所述的制备方法制备的传感器的检测方法，其特征在于，用于心肌肌钙蛋白I的检测，检测步骤如下：(1)使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为600V，循环伏安扫描范围为0.2～0.8V，扫描速率为0.1V/s；
(2)在10mL、pH＝6.98磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
(3)将待测样品溶液代替心肌肌钙蛋白I抗原溶液进行检测。 说明书 : 一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法及
应用技术领域[0001] 本发明属于一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法及应用。具体是以具有氧空位的锌锰双金属氧化物与鲁米诺的复合材料作为基底材料，用二氧化硅与聚多巴胺的复合材料作为标记物标记第二抗体，制备了一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器，属于新型功能纳米材料、免疫分析以及生物传感检测技术领域。背景技术[0002] 急性心肌梗死是心血管疾病死亡的主要原因，因此急性心肌梗死的早期诊断对于治疗心肌梗塞所造成的不可逆损伤具有十分重要的意义。心肌肌钙蛋白I是诊断心肌梗死的主要生物标志物。心肌肌钙蛋白I在正常人体内微量存在，但在心肌梗死发生时，心肌细胞毁损造成心肌肌钙蛋白I释放入血，心肌肌钙蛋白I会急剧升高，在24小时左右达到高峰，7?10天后下降至正常水平。心肌肌钙蛋白I升高的幅度与心肌细胞坏死程度具有一定程度的关联，如果病人血中心肌肌钙蛋白I异常升高，就意味着心肌的损伤或坏死的出现。于是检测心肌肌钙蛋白I含量对急性心肌梗死发生、预后及观察疗效具有重要意义。[0003] 过渡金属氧化物具有诱人的催化活性、高丰度、物理化学稳定性和低毒性，近年来在电催化、能源材料和电池领域引起了人们的广泛关注。锰酸锌ZMO作为尖晶石型过渡金属氧化物，具有物理化学性质稳定、价格低廉、低氧化电位、低毒性、低成本和环境友好等特性。而锰酸锌在本质上电导率较差，体积变化较大，导致电子扩散速度缓慢，这对心肌肌钙蛋白I的灵敏测定有着极为不利的影响。为了增强锰酸锌电导率，我们在锰酸锌表面引入氧空位，氧空位的形成导致氧原子位置空缺，进而影响周围电子重排，这有利于调节电子导电率，增加电化学活性位点，加速电荷扩散从而使电化学发光ECL强度有着显著促进作用。与此同时，介孔二氧化硅SiO2纳米颗粒具有面积大、孔径可调、外表面化学性质和固有的生物相容性等优点。二氧化硅制备免疫传感器的主要特点是高比表面积、机械稳定性、化学惰性和优良的生物相容性。聚多巴胺PDA，由多巴胺氧化聚合而成，是许多生物体内的类黑色素生物聚合物，含有大量的羟基和氨基官能团。由于这些官能团之间相互作用，使得聚多巴胺很容易功能化。在此基础上合成了二氧化硅与聚多巴胺的复合材料，提高了生物相容性和表面积。此外，二氧化硅与聚多巴胺的复合材料膜表面的活性醌可用于进一步固定抗体。同时，聚多巴胺被认为是ECL猝灭剂，其他邻苯二酚衍生物可以通过光诱导电子转移猝灭ECL强度。[0004] 目前用于检测心肌肌钙蛋白I抗原的方法主要是放射性免疫法，酶联免疫分析法和荧光免疫分析法等，但这些方法存在不能即时快速检测、具有放射性污染以及操作复杂等弊端，而电化学发光方法能够很好地克服这些弊端。电化学发光是一种氧化还原反应诱导的发光过程，反应物在电极表面通过发生电化学反应产生激发态，由激发态回到基态的过程中发光。基于抗原与抗体特异性识别而构建的免疫传感器，其制备过程简单、灵敏度高、检测限低、响应速度快，能够对心肌肌钙蛋白I进行快速灵敏的检测。发明内容[0005] 本发明提供了一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，实现了对心肌肌钙蛋白Ⅰ的精确灵敏检测。[0006] 本发明目的之一是提供一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法。[0007] 本发明目的之二是将所制备的富氧空位锌锰双金属氧化物的电化学发光免疫传感器应用于检测心肌肌钙蛋白Ⅰ。[0008] 本发明的技术方案如下：[0009] 1.一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：[0010] （1）将直径为3.0 5.0mm的玻碳电极用氧化铝抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇~中超声清洗干净；[0011] （2）取5.0?L、0.5 5.0mg/mL的Lu@Ov?ZMO分散液滴加到电极表面，室温条件下~自然晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；[0012] （3）继续将6.0?L、5.0 15.0?g/mL的心肌肌钙蛋白I抗体滴加到电极表面，4℃~冰箱中干燥；[0013] （4）继续将3.0?L、1.0 2.0wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封~闭电极表面上非特异性活性位点，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0014] （5）滴加6.0?L、0.02pg/mL 200ng/mL的一系列不同浓度的心肌肌钙蛋白I抗~原溶液，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0015] （6）将6.0?L、3.0~8.0mg/mL的检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液滴涂于电极表面，静置于4℃冰箱中30 40min，用pH=6.98的磷酸盐缓冲液冲洗，置于4℃冰箱中~晾干，制得一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器。[0016] 2.Lu@Ov?ZMO分散液的制备，包括以下步骤：[0017] （1）Ov?ZMO的制备[0018] 将1.05g聚乙烯吡咯烷酮，2.17g二水合醋酸锌和4.95g四水合醋酸锰依次分散在100mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液A；将6.0 6.5g~异烟酸溶解在60mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液B；随后将溶液A加入溶液B并加热至140℃保持24h，冷却后离心分离，用体积比为1:1的无水乙醇?1和二甲基甲酰胺洗涤沉淀三次，在80℃真空干燥后，置于管式炉中，以2℃·min 的速率升?1温至500 700℃保持2h；冷却后继续在氮气流中以2℃·min 的速率升温至700℃保持2~h，制得Ov?ZMO；[0019] （2）Lu@Ov?ZMO的制备[0020] 将5.0mL5.0 10.0mmol/L的鲁米诺溶液溶解于10mL0.1mol/L氢氧化钠溶~液中，继续加入20mL5.0 10.0mg/mL的Ov?ZMO溶液，室温下搅拌6h，后在7000r/min~下离心3min，所得沉淀50℃干燥2h，制得Lu@Ov?ZMO；[0021] 将0.5 5.0mgLu@Ov?ZMO超声分散于1.0mL超纯水中，制得Lu@Ov?ZMO分散液，~备用。[0022] 3.SiO2@PDA?Ab2分散液的制备，包括以下步骤：[0023] （1）SiO2的制备[0024] 将1.5mL正戊醇、30mL环己烷和2.7mL10 15mmol/L四乙氯硅酸盐连续搅拌~形成溶液A；将1.5 2.0g十六烷基三甲基溴化铵和0.6g尿素加入30mL超纯水中形成溶~液B；将溶液B快速加入溶液A中并搅拌0.5h，将混合液转移到50mL高压釜中，120℃加热4?1h，冷却至室温后依次用丙酮和超纯水离心洗涤三次并收集沉淀，真空干燥，以1℃·min 的速率升温至550℃保持6~8h，制得SiO2；[0025] （2）SiO2@PDA的制备[0026] 将0.05 0.10g多巴胺溶解在30mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液~中，向溶液中加入0.05~0.10gSiO2，室温下连续搅拌20h，后在7000r/min离心5min，50℃真空干燥后，制得SiO2@PDA；[0027] （3）检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液的制备[0028] 将1.0~3.0mL2.0mg/mL的SiO2@PDA溶液加入到1.0mL10μg/mL的检测抗体Ab2溶液中，4℃恒温振荡箱中震荡孵化12h；离心洗涤后，重新分散至1.0~3.0mL的pH=6.98的磷酸缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2溶液，4℃保存备用。[0029] 4.心肌肌钙蛋白Ⅰ的检测，步骤如下：[0030] （1）使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为600V，循环伏安扫描范围为0.2 0.8V，~扫描速率为0.1V/s；[0031] （2）在10mL、pH=6.98磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；[0032] （3）将待测样品溶液代替心肌肌钙蛋白I抗原溶液进行检测。[0033] 所制备的电化学发光免疫传感器检测线性范围为0.02pg/mL 200ng/mL，检测~限为6.6fg/mL。[0034] 材料合成所需要的化学试剂均为当地试剂店购得，没有经过再处理。[0035] 本发明的有益开云优惠体育网页版入口[0036] (1)本发明成功合成具有一定负载能力的Ov?ZMO材料，该材料制备方法简单，并具有较大的比表面积，能够负载更多的一抗和发光材料鲁米诺，引入氧空位可以对ZMO电子结构进行调节，有利于增强电子电导率，进而解决了单纯鲁米诺系统发光效率低的问题。[0037] （2）本发明利用SiO2@PDA作为二抗标记物，介孔二氧化硅纳米颗粒具有大面积、孔径可调、外表面化学和固有的生物相容性等特点。二氧化硅在免疫传感器制造中的主要特点是高比表面积、机械稳定性、化学惰性和优良的生物相容性。聚多巴胺含有大量的羟基和氨基官能团，由于这些官能团的存在，聚多巴胺很容易功能化。在此基础上，合成了SiO2@PDA，提高了其生物相容性和表面积。聚多巴胺可以通过光诱导电子转移来猝灭ECL强度以构建猝灭型电化学发光免疫传感器。[0038] 本发明的电化学发光免疫传感器了对心肌肌钙蛋白I抗原精确定量检测的目的，响应时间短，线性范围宽，检测限低，稳定性和重现性好，可实现简单、快捷、高灵敏和特异性的检测。本发明对心肌肌钙蛋白I的检测线性范围是0.02pg/mL 200ng/mL，检测限为~6.6fg/mL。具体实施方式[0039] 现将本发明通过具体实施方式进一步说明，但不限于此[0040] 实施例1一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：[0041] （1）将直径为3.0mm的玻碳电极用氧化铝抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；[0042] （2）取5.0?L、0.5mg/mL的Lu@Ov?ZMO分散液滴加到电极表面，室温条件下自然晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；[0043] （3）继续将6.0?L、5.0?g/mL的心肌肌钙蛋白I抗体滴加到电极表面，4℃冰箱中干燥；[0044] （4）继续将3.0?L、1.0wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0045] （5）滴加6.0?L、0.02pg/mL 200ng/mL的一系列不同浓度的心肌肌钙蛋白I抗~原溶液，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0046] （6）将6.0?L、3.0mg/mL的检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液滴涂于电极表面，静置于4℃冰箱中30min，用pH=6.98的磷酸盐缓冲液冲洗，置于4℃冰箱中晾干，制得一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器。[0047] 实施例2一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：[0048] （1）将直径为4.0mm的玻碳电极用氧化铝抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；[0049] （2）取5.0?L、3.0mg/mL的Lu@Ov?ZMO分散液滴加到电极表面，室温条件下自然晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；[0050] （3）继续将6.0?L、10.0?g/mL的心肌肌钙蛋白I抗体滴加到电极表面，4℃冰箱中干燥；[0051] （4）继续将3.0?L、1.5wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0052] （5）滴加6.0?L、0.02pg/mL 200ng/mL的一系列不同浓度的心肌肌钙蛋白I抗~原溶液，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0053] （6）将6.0?L、5.0mg/mL的检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液滴涂于电极表面，静置于4℃冰箱中35min，用pH=6.98的磷酸盐缓冲液冲洗，置于4℃冰箱中晾干，制得一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器。[0054] 实施例3.一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：[0055] （1）将直径为5.0mm的玻碳电极用氧化铝抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；[0056] （2）取5.0?L、5.0mg/mL的Lu@Ov?ZMO分散液滴加到电极表面，室温条件下自然晾干，用超纯水冲洗电极表面，在室温下晾干；[0057] （3）继续将6.0?L、15.0?g/mL的心肌肌钙蛋白I抗体滴加到电极表面，4℃冰箱中干燥；[0058] （4）继续将3.0?L、2.0wt%的牛血清白蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0059] （5）滴加6.0?L、0.02pg/mL 200ng/mL的一系列不同浓度的心肌肌钙蛋白I抗~原溶液，pH=6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；[0060] （6）将6.0?L、8.0mg/mL的检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液滴涂于电极表面，静置于4℃冰箱中40min，用pH=6.98的磷酸盐缓冲液冲洗，置于4℃冰箱中晾干，制得一种富氧空位锌锰双金属氧化物的免疫传感器。[0061] 实施例4.Lu@Ov?ZMO分散液的制备，包括以下步骤：[0062] （1）Ov?ZMO的制备[0063] 将1.05g聚乙烯吡咯烷酮，2.17g二水合醋酸锌和4.95g四水合醋酸锰依次分散在100mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液A；将6.0g异烟酸溶解在60mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液B；随后将溶液A加入溶液B并加热至140℃保持24h，冷却后离心分离，用体积比为1:1的无水乙醇和二甲基?1甲酰胺洗涤沉淀三次，在80℃真空干燥后，置于管式炉中，以2℃·min 的速率升温至500℃?1保持2h；冷却后继续在氮气流中以2℃·min 的速率升温至700℃保持2h，制得Ov?ZMO；[0064] （2）Lu@Ov?ZMO的制备[0065] 将5.0mL5.0mmol/L的鲁米诺溶液溶解于10mL0.1mol/L氢氧化钠溶液中，继续加入20mL5.0mg/mL的Ov?ZMO溶液，室温下搅拌6h，后在7000r/min下离心3min，所得沉淀50℃干燥2h，制得Lu@Ov?ZMO；[0066] 将0.5mgLu@Ov?ZMO超声分散于1.0mL超纯水中，制得Lu@Ov?ZMO分散液，备用。[0067] 实施例5.Lu@Ov?ZMO分散液的制备，包括以下步骤：[0068] （1）Ov?ZMO的制备[0069] 将1.05g聚乙烯吡咯烷酮，2.17g二水合醋酸锌和4.95g四水合醋酸锰依次分散在100mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液A；将6.3g异烟酸溶解在60mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液B；随后将溶液A加入溶液B并加热至140℃保持24h，冷却后离心分离，用体积比为1:1的无水乙醇和二甲基?1甲酰胺洗涤沉淀三次，在80℃真空干燥后，置于管式炉中，以2℃·min 的速率升温至600℃?1保持2h；冷却后继续在氮气流中以2℃·min 的速率升温至700℃保持2h，制得Ov?ZMO；[0070] （2）Lu@Ov?ZMO的制备[0071] 将5.0mL8.0mmol/L的鲁米诺溶液溶解于10mL0.1mol/L氢氧化钠溶液中，继续加入20mL8.0mg/mL的Ov?ZMO溶液，室温下搅拌6h，后在7000r/min下离心3min，所得沉淀50℃干燥2h，制得Lu@Ov?ZMO；[0072] 将3.0mgLu@Ov?ZMO超声分散于1.0mL超纯水中，制得Lu@Ov?ZMO分散液，备用。[0073] 实施例6.Lu@Ov?ZMO分散液的制备，包括以下步骤：[0074] （2）Ov?ZMO的制备[0075] 将1.05g聚乙烯吡咯烷酮，2.17g二水合醋酸锌和4.95g四水合醋酸锰依次分散在100mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液A；将6.5g异烟酸溶解在60mL体积比为1:1的无水乙醇和二甲基甲酰胺混合溶液中形成溶液B；随后将溶液A加入溶液B并加热至140℃保持24h，冷却后离心分离，用体积比为1:1的无水乙醇和二甲基?1甲酰胺洗涤沉淀三次，在80℃真空干燥后，置于管式炉中，以2℃·min 的速率升温至700℃?1保持2h；冷却后继续在氮气流中以2℃·min 的速率升温至700℃保持2h，制得Ov?ZMO；[0076] （3）Lu@Ov?ZMO的制备[0077] 将5.0mL10mmol/L的鲁米诺溶液溶解于10mL0.1mol/L氢氧化钠溶液中，继续加入20mL10mg/mL的Ov?ZMO溶液，室温下搅拌6h，后在7000r/min下离心3min，所得沉淀50℃干燥2h，制得Lu@Ov?ZMO；[0078] 将5.0mgLu@Ov?ZMO超声分散于1.0mL超纯水中，制得Lu@Ov?ZMO分散液，备用。[0079] 实施例7.SiO2@PDA?Ab2分散液的制备，包括以下步骤：[0080] （1）SiO2的制备[0081] 将1.5mL正戊醇、30mL环己烷和2.7mL10mmol/L四乙氯硅酸盐连续搅拌形成溶液A；将1.5g十六烷基三甲基溴化铵和0.6g尿素加入30mL超纯水中形成溶液B；将溶液B快速加入溶液A中并搅拌0.5h，将混合液转移到50mL高压釜中，120℃加热4h，冷却至室?1温后依次用丙酮和超纯水离心洗涤三次并收集沉淀，真空干燥，以1℃·min 的速率升温至550℃保持6h，制得SiO2；[0082] （2）SiO2@PDA的制备[0083] 将0.05g多巴胺溶解在30mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中，向溶液中加入0.05gSiO2，室温下连续搅拌20h，后在7000r/min离心5min，50℃真空干燥后，制得SiO2@PDA；[0084] （3）检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液的制备[0085] 将1.0mL2.0mg/mL的SiO2@PDA溶液加入到1.0mL10μg/mL的检测抗体Ab2溶液中，4℃恒温振荡箱中震荡孵化12h；离心洗涤后，重新分散至1.0mL的pH=6.98的磷酸缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2溶液，4℃保存备用。[0086] 实施例8.SiO2@PDA?Ab2分散液的制备，包括以下步骤：[0087] （1）SiO2的制备[0088] 将1.5mL正戊醇、30mL环己烷和2.7mL13mmol/L四乙氯硅酸盐连续搅拌形成溶液A；将1.8g十六烷基三甲基溴化铵和0.6g尿素加入30mL超纯水中形成溶液B；将溶液B快速加入溶液A中并搅拌0.5h，将混合液转移到50mL高压釜中，120℃加热4h，冷却至室?1温后依次用丙酮和超纯水离心洗涤三次并收集沉淀，真空干燥，以1℃·min 的速率升温至550℃保持7h，制得SiO2；[0089] （2）SiO2@PDA的制备[0090] 将0.08g多巴胺溶解在30mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中，向溶液中加入0.08gSiO2，室温下连续搅拌20h，后在7000r/min离心5min，50℃真空干燥后，制得SiO2@PDA；[0091] （3）检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液的制备[0092] 将2.0mL2.0mg/mL的SiO2@PDA溶液加入到1.0mL10μg/mL的检测抗体Ab2溶液中，4℃恒温振荡箱中震荡孵化12h；离心洗涤后，重新分散至2.0mL的pH=6.98的磷酸缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2溶液，4℃保存备用。[0093] 实施例9.SiO2@PDA?Ab2分散液的制备，包括以下步骤：[0094] （1）SiO2的制备[0095] 将1.5mL正戊醇、30mL环己烷和2.7mL15mmol/L四乙氯硅酸盐连续搅拌形成溶液A；将2.0g十六烷基三甲基溴化铵和0.6g尿素加入30mL超纯水中形成溶液B；将溶液B快速加入溶液A中并搅拌0.5h，将混合液转移到50mL高压釜中，120℃加热4h，冷却至室?1温后依次用丙酮和超纯水离心洗涤三次并收集沉淀，真空干燥，以1℃·min 的速率升温至550℃保持8h，制得SiO2；[0096] （2）SiO2@PDA的制备[0097] 将0.10g多巴胺溶解在30mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液中，向溶液中加入0.10gSiO2，室温下连续搅拌20h，后在7000r/min离心5min，50℃真空干燥后，制得SiO2@PDA；[0098] （3）检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2分散液的制备[0099] 将3.0mL2.0mg/mL的SiO2@PDA溶液加入到1.0mL10μg/mL的检测抗体Ab2溶液中，4℃恒温振荡箱中震荡孵化12h；离心洗涤后，重新分散至3.0mL的pH=6.98的磷酸缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物SiO2@PDA?Ab2溶液，4℃保存备用。[0100] 实施例10.心肌肌钙蛋白Ⅰ的检测，步骤如下：[0101] （1）使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为600V，循环伏安扫描范围为0.2 0.8V，~扫描速率为0.1V/s；[0102] （2）在10mL、pH=6.98磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；[0103] （3）将待测样品溶液代替心肌肌钙蛋白I抗原溶液进行检测，测得对心肌肌钙蛋白I检测线性范围是0.02pg/mL 200ng/mL，检测限为6.6fg/mL。~

专利地区：山东

专利申请日期：2022-09-19

专利公开日期：2024-11-29

专利公告号：CN115452913B