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专利名称：一种冬荪及竹荪原种的培养基及培养方法

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202310242172.9

专利申请（专利权）人：贵州省生物研究所
权利人地址：贵州省贵阳市小河经济开发区桐荫路1号

专利发明（设计）人：康超,郑旋,王万坤,杨玲,曾维军,刘忠玄,王晶,王芳

专利摘要：本发明属于食用菌技术领域，具体涉及一种冬荪及竹荪原种的培养基及培养方法；培养基主要由黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、ZnSO4、NH4Cl、黄原胶等组成，黄原胶可有效分散非溶物质形成混悬液，避免黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉发生沉淀，保证培养基的均匀度；小麦淀粉、胡萝卜粉可有效保持营养供给，维持菌丝正常生长；黄豆粉、ZnSO4、NH4Cl能有效提高菌丝生长速率，促进菌丝延伸。固体培养基上，菌丝浓密，长势好，15?30d长满。液体原种采用分段式培养，菌丝生物量大，菌丝球分散均匀，数量多。该法具有营养成分来源广泛、工艺简单，菌种萌发快，菌丝延伸能等优势，可用于冬荪竹荪菌种保存、科学研究、工厂生产等领域。

主权利要求：
1.一种冬荪及竹荪原种的培养基，其特征在于，由固体原种培养基和液体原种培养基组成；所述固体原种培养基的配方为葡萄糖8?12g/L、黄豆粉8?15g/L、小麦淀粉4?6g/L、胡萝卜粉4?6g/L、硫酸锌0.45?1.29g/L、氯化铵0.47?0.98g/L、黄原胶0.5?1.0g/L，琼脂20g/L；所述液体原种培养基的配方为葡萄糖8?12g/L、黄豆粉8?15g/L、小麦淀粉4?6g/L、胡萝卜粉4?6g/L、硫酸锌0.45?1.29g/L、氯化铵0.47?0.98g/L、黄原胶0.5?1.0g/L，溶剂为常温水；
所述固体原种培养基的制备方法，包括如下步骤：
1）制备黄原胶溶液：取1/3体积的常温水，将黄原胶少量多次加入到常温水中，添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀备用；
2）制备固体培养基悬浊液：再取1/3体积的常温水，称取胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到常温水中，在添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀，制成分散液，随后向分散液中加入琼脂，加热至溶解，备用；
3）制备固体原种培养基：将步骤1）的黄原胶溶液、步骤2）的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，加入剩余常温水定容，搅拌均匀后分装于玻璃三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，按需分装至试管或平皿中，制成斜面培养基或平面培养基；
所述液体原种培养基的制备方法，包括如下步骤：
1）制备黄原胶溶液：取1/3体积的常温水，将黄原胶少量多次加入到常温水中，添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀备用；
2）制备液体培养基悬浊液：再取1/3体积的常温水，称取胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到常温水中，在添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀；
3）制备液体原种培养基：将步骤1）的黄原胶溶液、步骤2）的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌混合，加入剩余常温水定容，搅拌均匀后，按20?60%装液量分装于玻璃三角瓶或其他培养容器中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，冷却备用。
2.一种利用如权利要求1所述的冬荪及竹荪原种的培养基进行原种培养的方法，其特征在于，分为固体培养和液体培养，且固体培养和液体培养单独进行。
3.一种利用如权利要求1所述的冬荪及竹荪原种的培养基进行原种培养的方法，其特征在于，所述固体培养是将冬荪竹荪母种活化后，接种到固体原种培养基上，在20?28℃条件下培养15?30d，即得固体原种。
4.一种利用如权利要求1所述的冬荪及竹荪原种的培养基进行原种培养的方法，其特征在于，所述液体培养采取分段培养，具体是：将冬荪竹荪母种活化后，挑取适量母种置于三角瓶瓶内壁上并接近液面，于20?28℃条件下静置培养7?10d，随后置于振荡培养器上，
20?28℃，130?180r/min条件下培养15?20d，即得液体原种。 说明书 : 一种冬荪及竹荪原种的培养基及培养方法技术领域[0001] 本发明涉及食用菌技术领域，尤其是一种冬荪及竹荪原种的培养基及培养方法。背景技术[0002] 冬荪和竹荪，是一类可食用鬼笔属真菌的统称，冬荪主要包括冬荪、白鬼笔、香鬼笔、重脉鬼笔等，又称为竹下菌、竹菌、无裙荪；竹荪主要包括红托竹荪、长裙竹荪、棘托竹荪、短裙竹荪等，被称为“真菌之花”、“真菌皇后”、“山珍之王”、“竹花”等。竹荪冬荪均属鬼笔目(Phallales)，鬼笔科(Phallaceae)，鬼笔属(Phallus)。[0003] 冬荪味道鲜美，口感松脆，且具有极高的营养价值。据《开云优惠体育网页版入口中草药汇编》和《中华本草》中记载，冬荪菌柄、菌托和子实体均可入药，药性为甘、淡、温，有活血止痛、祛风除湿的功效，可用于治疗风湿痛等疾。被咕哂锌拱┗钚。2016年“大方冬荪”获得国家地理标志产品。竹荪风味独特，含有丰富的多糖、蛋白质、氨基酸、维生素、和多种无机盐等营养成分，具有较高的食用、保健以及药用价值。红托竹荪主要生长于贵州、云南、四川和浙江等竹林的腐殖土。2010年，“织金竹荪”获得国家地理标志。贵州冬荪竹荪已成为贵州最具特色的食用菌。[0004] 随着大家对冬荪及竹荪的了解和认识，产品需求量逐步加大，种植面积也随之扩大，其母种和原种的制备和保存直接影响到该产业的发展。目前，种植户普遍采用组织块直接接入木屑培养基中获得母种，该法常常菌种不纯，导致后期原种和栽培种污染率大。而采用普通培养基(一般为PDA或加富PDA)进行菌种分离和保存，冬荪竹荪组织块或菌种块在培养基上常常只萌发，但菌丝生长缓慢或不生长，无法开展菌种保存、科学研究、工厂生产。因此，改善冬荪竹荪培养基配方和培养法方法，有效提升菌丝生长能力，是菌种生产和保存亟待解决问题。[0005] 目前，大量的现有技术表明冬荪和竹荪的培养基和培养条件均不同，比如文献《鬼笔类真菌三个种的培养特性及个体发育研究》(李政于2022年发表)中记载了：1)超短裙竹荪和冬荪的亲缘关系较近，与红托竹荪的亲缘关系较远；2)超短裙竹荪的最佳培养条件为葡萄糖15.3g/L、蛋白胨2.3g/L、pH6.5、温度26℃，培养基中添加50～150mg/L的维生素B1和2.0～2.5g/L的KH2PO4能够促进菌丝的生长，添加超过0.5g/L的MgSO4会抑制菌丝的生长；3)冬荪的最佳培养条件为葡萄糖23g/L、酵母浸粉5.3g/L、pH5.5、温度26℃，培养基中添加1.0～1.5g/L的KH2PO4能够促进菌丝的生长，添加维生素B1和MgSO4不能促进菌丝的生长；4)红托竹荪的最佳培养条件组合为蔗糖、酵母浸粉、pH5、温度28℃。由此可知：冬荪和竹荪的营养需求、培养特性是不同的，所以要找寻一种同时用于冬荪、竹荪发菌的培养基也是具有挑战的。发明内容[0006] 为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种冬荪及竹荪原种的培养基及培养方法，具体是通过以下技术方案得以实现的。[0007] 本发明的第一目的是提供：一种冬荪及竹荪原种的培养基，由固体原种培养基和液体原种培养基组成；所述固体原种培养基的配方为葡萄糖8?12g/L、黄豆粉8?15g/L、小麦淀粉4?6g/L、胡萝卜粉4?6g/L、硫酸锌0.45?1.29g/L、氯化铵0.47?0.98g/L、黄原胶0.5?1.0g/L，琼脂20g/L；所述液体原种培养基的配方为葡萄糖8?12g/L、黄豆粉8?15g/L、小麦淀粉4?6g/L、胡萝卜粉4?6g/L、硫酸锌0.45?1.29g/L、氯化铵0.47?0.98g/L、黄原胶0.5?1.0g/L，溶剂为常温水。[0008] 所述固体原种培养基的制备方法，包括如下步骤：[0009] 1)制备黄原胶溶液：按照配方量要求，取常温水总体积的1/3,将黄原胶少量多次加入到常温水中，添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀备用；[0010] 2)制备固体培养基悬浊液：按照配方量要求，再取常温水总体积的1/3,称取胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到常温水中，添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀，制成分散液，随后向分散液中加入琼脂，加热至溶解，备用；[0011] 3)制备固体原种培养基：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，加入剩余常温水定容，搅拌均匀后分装于玻璃三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，按需分装至试管或平皿中，制成斜面培养基或平面培养基。[0012] 所述液体原种培养基的制备方法，包括如下步骤：[0013] 1)制备黄原胶溶液：按照配方量要求，取常温水总体积的1/3，将黄原胶少量多次加入到常温水中，添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀备用；[0014] 2)制备液体培养基悬浊液：按照配方量要求，再取常温水总体积的1/3，称取胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到常温水中，添加的过程中不断搅拌，直至分散均匀；[0015] 3)制备液体原种培养基：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌混合，加入剩余常温水定容，搅拌均匀后，按20?60％装液量分装于玻璃三角瓶或其他培养容器中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，冷却备用。[0016] 本发明的第二目的是提供：一种冬荪及竹荪原种的培养方法，分为固体培养和液体培养，且固体培养和液体培养单独进行；[0017] 所述固体培养是将冬荪竹荪母种活化后，接种到固体原种培养基上，在20?28℃条件下培养15?30d，即得固体原种。[0018] 所述液体培养采取分段培养，具体是：将冬荪竹荪母种活化后，挑取适量母种置于三角瓶瓶内壁上并接近液面，于20?28℃条件下静置培养7?10d，随后置于振荡培养器上，20?28℃，130?180r/min条件下培养15?20d，即得液体原种。[0019] 与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在：[0020] 本发明基于碳源为葡萄糖，天然碳源为小麦粉、胡萝卜粉，氮源为黄豆粉，无机盐为硫酸锌、氯化铵，增稠剂为黄原胶，提高了菌丝生长速度；其中黄原胶可有效分散非溶物质形成混悬液，避免黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉沉淀，保证培养基的均匀度；小麦淀粉、胡萝卜粉可有效保持生长全过程的营养持续供给，维持菌丝正常生长；黄豆粉能促进气生菌丝生长；ZnSO4、NH4Cl可提升菌丝贴壁生长及延伸能力，使其延伸至整个培养基表面。[0021] 液体原种采用分段式培养，菌丝生物量大，菌丝球分散均匀，数量多。[0022] 该法具有营养成分来源广泛、工艺简单，菌种萌发快，菌丝延伸能强，菌丝生长旺盛，生物量大等优势，可用于冬荪竹荪菌种保存、科学研究、工厂生产等领域。附图说明[0023] 图1不同培养基营养成分对冬荪菌丝生长的影响，其中A：PDA培养基；B：加富PDA培养基；C：实施例1；D：实施例2；E：实施例3；F：实施例4；[0024] 图2红托竹荪在优化培养基上的生长状态，其中A：实施例5的方法培养15天；B：实施例6的方法培养28天；[0025] 图3为红托竹荪在液体培养基中的生长状态，其中A：实施例8的培养基未接种菌种；B：按实施例8的方法接种红托竹荪菌种；[0026] 图4为冬荪在不同无机盐条件下菌丝生长状态，其中A：实施例4；B：对比例1；C：对比例2；D：对比例3；E：对比例4；F：对比例5。具体实施方式[0027] 下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。[0028] 实施例1[0029] 一种冬荪原种的固体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0030] 1、固体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉12.5g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.63g/L、氯化铵0.57g/L、黄原胶0.5g/L，琼脂20g/L；[0031] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶、琼脂；[0032] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0033] 4、固体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，随后称取琼脂20g至悬浊液中，搅拌、加热至溶解，备用；[0034] 5、固体培养基制备：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，待培养基冷却至50℃左右，将培养基倾倒入玻璃平皿，每个平面15?20mL，培养基凝固后备用；[0035] 6、固体原种培养：无菌条件下，将冬荪木屑母种直接接种到斜平板培养基中央，置于恒温培养箱中，25℃条件下培养28d，菌丝生长旺盛，菌丝直径68.32mm左右；[0036] 实施例2[0037] 一种冬荪原种的固体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0038] 1、固体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉7.5g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.63g/L、氯化铵0.87g/L、黄原胶0.5g/L，琼脂20g/L；[0039] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶、琼脂；[0040] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0041] 4、固体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，随后称取琼脂20g至悬浊液中，搅拌、加热至溶解，备用；[0042] 5、固体培养基制备：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，待培养基冷却至50℃左右，将培养基倾倒入玻璃平皿，每个平面15?20mL，培养基凝固后备用；[0043] 6、固体原种培养：无菌条件下，将冬荪木屑母种直接接种到斜平板培养基中央，置于恒温培养箱中，26℃条件下培养28d，菌丝生长旺盛，菌丝直径64.86mm左右。[0044] 实施例3[0045] 一种冬荪原种的固体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0046] 1、固体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉5.8g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.88g/L、氯化铵0.72g/L、黄原胶0.5g/L、琼脂20g/L；[0047] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶、琼脂；[0048] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0049] 4、固体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，随后称取琼脂20g至悬浊液中，搅拌、加热至溶解，备用；[0050] 5、固体培养基制备：将上步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，待培养基冷却至50℃左右，将培养基倾倒入玻璃平皿，每个平面15?20mL，培养基凝固后备用；[0051] 6、固体原种培养：无菌条件下，将冬荪木屑母种直接接种到斜平板培养基中央，置于恒温培养箱中，25℃条件下培养28d，菌丝生长旺盛，菌丝直径66.95mm左右。[0052] 实施例4[0053] 一种冬荪原种的固体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0054] 1、固体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉10g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.88g/L、氯化铵0.72g/L、黄原胶0.5g/L、琼脂20g/L[0055] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶、琼脂；[0056] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0057] 4、固体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，随后称取琼脂20g至悬浊液中，搅拌、加热至溶解，备用；[0058] 5、固体培养基制备：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，待培养基冷却至50℃左右，将培养基倾倒入玻璃平皿，每个平面15?20mL，培养基凝固后备用；[0059] 6、固体原种培养：无菌条件下，将冬荪木屑母种直接接种到斜平板培养基中央，置于恒温培养箱中，25℃条件下培养28d，菌丝生长旺盛，菌丝直径63.56mm左右。[0060] 实验例1[0061] 在相同培养条件下，分别利用PDA培养基、加富PDA培养基(PDA的基础上添加了KH2PO41g/L，MgSO40.5g/L)、实施例1培养基、实施例2培养基、实施例3培养基、实施例4培养基对冬荪进行培养，培养28天后的情况如图1所示。[0062] 实施例5[0063] 一种竹荪原种的固体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0064] 1、固体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉12.5g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.63g/L、氯化铵0.57g/L、黄原胶0.5g/L，琼脂20g/L；[0065] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶、琼脂；[0066] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0067] 4、固体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，随后称取琼脂20g至悬浊液中，搅拌、加热至溶解，备用；[0068] 5、固体培养基制备：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，待培养基冷却至50℃左右，将培养基倾倒入玻璃平皿，每个平面15?20mL，培养基凝固后备用；[0069] 6、固体原种培养：无菌条件下，将竹荪木屑母种直接接种到斜平板培养基中央，置于恒温培养箱中，25℃条件下培养15d，菌丝生长旺盛，菌丝直径57.27mm左右。[0070] 实施例6[0071] 一种竹荪原种的固体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0072] 1、固体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉10g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.88g/L、氯化铵0.72g/L、黄原胶0.5g/L、琼脂20g/L；[0073] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶、琼脂；[0074] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0075] 4、固体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，随后称取琼脂20g至悬浊液中，搅拌、加热至溶解，备用；[0076] 5、固体培养基制备：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌、琼脂混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，待培养基冷却至50℃左右，将培养基倾倒入玻璃平皿，每个平面15?20mL，培养基凝固后备用；[0077] 6、固体原种培养：无菌条件下，将竹荪木屑母种直接接种到斜平板培养基中央，置于恒温培养箱中，25℃条件下培养28d，菌丝长满90mm玻璃平板，菌丝生长旺盛。[0078] 实施例7[0079] 一种冬荪原种的液体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0080] 1、液体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉12.5g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.63g/L、氯化铵0.57g/L、黄原胶0.5g/L；[0081] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶；[0082] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0083] 4、液体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，备用；[0084] 5、液体培养基制备：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，冷却备用；[0085] 6、液体原种培养：无菌条件下，冬荪液体原种采用分段式培养，即直接挑取适量冬荪原种置于三角瓶瓶内壁上(接近液面附近)，置于恒温培养箱中，20?28℃条件下，静置培养10d，随后置于振荡培养器上，25℃，150r/min，培养20天，即得液体原种，液体种菌丝球多，生物量大，均匀，达9.35g/L左右。[0086] 实施例8[0087] 一种竹荪原种的液体培养基及其培养方法，包括如下步骤：[0088] 1、液体培养基配方：葡萄糖10g/L、黄豆粉10g/L、小麦淀粉5g/L、胡萝卜粉5g/L、硫酸锌0.88g/L、氯化铵0.72g/L、黄原胶0.5g/L；[0089] 2、材料准备：按照配方量分别称取葡萄糖、黄豆粉、小麦淀粉、胡萝卜粉、硫酸锌、氯化铵、黄原胶；[0090] 3、黄原胶溶液制备：将黄原胶少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至分散均匀备用；[0091] 4、液体培养基悬浊液制备：将胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉，少量多次加入到100mL水(常温)中，添加的同时进行搅拌，直至胡萝卜粉、小麦淀粉、黄豆粉分散均匀，备用；[0092] 5、液体培养基制备：将步骤1)的黄原胶溶液、步骤2)的固体培养基混悬液、氯化铵、硫酸锌混合，将总体积定容至300mL，搅拌均匀后装入500mL三角瓶中，置于高压蒸汽灭菌器中，121℃条件下，灭菌30min后，冷却备用；[0093] 6、液体原种培养：无菌条件下，竹荪液体原种采用分段式培养，即直接挑取适量竹荪原种置于三角瓶瓶内壁上(接近液面附近)，置于恒温培养箱中，25℃条件下，静置培养10d，随后置于振荡培养器上，25℃，160r/min，培养25天，即得液体原种，液体种菌丝球多，均匀，生物量大，达11.45g/L左右。[0094] 实验例2[0095] 对比不同实施例可知，本发明的方法能有效保持营养供给，维持菌丝正常生长，且菌丝生长速度较快，可有效提升菌丝贴壁(培养基表面)及延伸能力，菌丝活力强，菌丝生长旺盛，生物量大，有利于菌种制备和保存。本申请考虑到微量元素之间以及与磷、硫元素之间的互促作用，以及微量元素、磷、硫对菌丝体的生长影响，在研究初期选择无机盐时，靶向在磷酸盐、硫酸镁、氯化镁、氯化钙等物质上，但结果呈现显著差异，最后研究发现：硫酸锌和氯化铵的组合具有促进菌丝体生长，改善发菌效果，绿色安全，且使培养基能够同时满足冬荪、竹荪的营养需求，促进两种不同菌丝体的营养物质吸收、转化的特点，具体情况如下：[0096] 对比例1：在无机盐单因素筛选过程中，添加硫酸锌后冬荪菌丝生长速度很快，长势好，密。[0097] 对比例2：在无机盐单因素筛选过程中，添加氯化铵后冬荪菌丝生长速度很快，长势良好，密。[0098] 对比例3：在实施例4的基础上，将硫酸锌、氯化铵替换为磷酸二氢钾，冬荪菌丝长势良好，较密，但生长速度较慢；[0099] 对比例4：在实施例4的基础上，将硫酸锌、氯化铵替换为硫酸镁，菌丝较密，长势旺盛，菌丝速度很慢；[0100] 对比例5：在实施例4的基础上，将硫酸锌、氯化铵替换为氯化钙，冬荪菌丝长势良好，较密，但生长速度较慢；[0101] 各对比试验组菌丝生长情况结果见表1，菌丝生长情况见图4所示，由表1和图4可知，选择常用无机盐的培养效果不理想。[0102] 表1菌丝生长情况表[0103][0104] 最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

专利地区：贵州

专利申请日期：2023-03-14

专利公开日期：2024-11-29

专利公告号：CN116076305B