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专利名称：一种西施舌的人工繁育方法

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202410135474.0

专利申请（专利权）人：广东海洋大学
权利人地址：广东省湛江市麻章区海大路1号

专利发明（设计）人：栗志民,王丽君,候勇康,张方琪

专利摘要：本发明涉及水产养殖技术领域，特别是涉及一种西施舌的人工繁育方法。本发明以湛江徐闻海域采捕的3?4龄西施舌为亲贝，经阴干?流水刺激诱导亲贝排放精卵；以虾塘藻，并辅以浓缩小球藻(藻膏)作为浮游幼虫、稚贝和幼贝饵料；采用封闭育苗模式进行浮游幼虫和稚贝的培育；采用“附着板+池底”附苗模式进行采苗；采用“封闭育苗”模式进行稚贝培育。本发明突破了双壳类传统育苗方法，证实虾塘藻，并辅以浓缩小球藻(藻膏)能够满足西施舌浮游幼虫、稚贝和幼贝对饵料的需要，“附着板+池底”附苗模式可以取得较好的采苗效果，“封闭育苗”模式适于作为西施舌从浮游幼虫至幼贝的培育模式。

主权利要求：
1.一种西施舌的人工繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：以3?4龄西施舌为亲贝，进行催产和孵化，得到西施舌幼虫；
以虾塘藻和浓缩小球藻为饵料，利用封闭式育苗法培育西施舌幼虫，得到西施舌稚贝；
所述培育过程中，当30％的西施舌幼虫出现眼点时，以塑料板和池底为附着板进行采苗；
以虾塘藻和浓缩小球藻为饵料，利用无底质封闭育苗法培育西施舌稚贝直至出苗；
所述封闭式育苗法为培育过程中不换水且不倒池的育苗方法；
所述无底质封闭育苗法为培育过程中不换水、不倒池且池底不铺设任何底质的育苗方法；
以湛江徐闻海域采捕的3?4龄西施舌为亲贝，经阴干?流水刺激成功诱导亲贝排放精卵；以虾塘藻，并辅以浓缩小球藻作为浮游幼虫、稚贝和幼贝饵料；采用封闭育苗模式进行浮游幼虫和稚贝的培育；采用“附着板+池底”附苗模式进行采苗；
采用“附着板+池底”附苗模式对西施舌进行生产性采苗，附着板附苗使用的是珍珠贝采苗常用的黑色塑料板，池底附苗是在池底不铺设细砂，西施舌附着期幼虫直接在池底附着的采苗方法；西施舌附着幼虫经过7?10天的附着生活后，开始脱离附着基进入池底生活，由于池底不铺设细砂，稚贝借助腹足在池底自由匍匐和滑行运动；
“封闭育苗”，即一池水育一池苗；双壳贝类育苗过程中，换水容易引起贝苗的应激死亡，导致育苗失败，而“封闭育苗”是在整个育苗过程中不换水、不倒池，通过使用光合细菌和硝化细菌微生态制剂调节水质，保持池水微生物生态平衡，促进贝苗健康生长。
2.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述西施舌幼虫培育过程中，饵料的饲喂频率为2次/d，培育的温度为25.5?27.5℃。
3.根据权利要求2所述的人工繁育方法，其特征在于，以水的体积计，所述饵料中虾塘
4 4 3
藻每次的饲喂量为(1×10)?(2×10)cell/mL，浓缩小球藻每次的饲喂量为(1×10)?(2×3
10)cell/mL。
4.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述塑料板为多层塑料板；两层塑料板之间的层间距为12cm。
5.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述西施舌稚贝培育过程中，饵料的饲喂频率为2次/d，培育的温度为26.5?29.7℃。
6.根据权利要求5所述的人工繁育方法，其特征在于，以水的体积计，所述饵料中虾塘
4 5) 3 4
藻每次的饲喂量为(2×10)?(1×10 cell/mL，浓缩小球藻的饲喂量为(2×10)?(1×10)cell/mL。
7.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述催产包括阴干结合流水刺激的步骤。
8.根据权利要求7所述的人工繁育方法，其特征在于，所述阴干的时间为3?4h；所述流水刺激的时间为0.5?1h。 说明书 : 一种西施舌的人工繁育方法技术领域[0001] 本发明涉及水产养殖技术领域，特别是涉及一种西施舌的人工繁育方法。背景技术[0002] 西施舌肉质脆嫩，味甘美，有很高的食用价值。自20世纪80年代开始，对西施舌的捕捞强度逐年加大，其资源量逐年衰退。为保护和开发这种名贵双壳贝类，自20世纪60年代起，国内便开始研究西施舌人工育苗技术，20世纪90年代以来，研究开云优惠体育网页版入口日益增多，主要集中在西施舌的生理、生态、繁殖发生、生长发育、群体遗传和人工育苗等。随着沿海渔民不断加大对西施舌的捕捞，湛江沿海西施舌自然资源锐减，目前仅有徐闻后海外罗港海域有少部分资源。因此，在湛江沿海大力开展西施舌的人工繁育和增养殖十分必要。早在20世纪60年代，国内学者陈文龙等首次对西施舌的人工育苗技术进行了研究，上世纪80年代以后，辽宁、山东、福建等地先后有多位学者积极开展该贝类的人工育苗技术研究并成功培育出苗种，然而，在广东特别是湛江沿海，该贝类人工繁育技术的研究还比较缺乏，这不利于当地西施舌自然资源的恢复，也无法满足市场对该贝类的日益需求。发明内容[0003] 本发明的目的是提供一种西施舌的人工繁育方法，以解决上述现有技术存在的问题。[0004] 为实现上述目的，本发明提供了如下方案：[0005] 本发明提供一种西施舌的人工繁育方法，包括以下步骤：[0006] 以3?4龄西施舌为亲贝，进行催产和孵化，得到西施舌幼虫；[0007] 以虾塘藻和浓缩小球藻为饵料，利用封闭式育苗法培育西施舌幼虫，得到西施舌稚贝；所述培育过程中，当30％的西施舌幼虫出现眼点时，以塑料板和池底为附着板进行采苗；[0008] 以虾塘藻和浓缩小球藻为饵料，利用无底质封闭育苗法培育西施舌稚贝直至出苗。[0009] 优选的，所述封闭式育苗法为培育过程中不换水且不倒池的育苗方法。[0010] 优选的，所述无底质封闭育苗法为培育过程中不换水、不倒池且池底不铺设任何底质的育苗方法。[0011] 优选的，所述西施舌幼虫培育过程中，饵料的饲喂频率为2次/d，培育的温度为25.5?27.5℃。[0012] 优选的，以水的体积计，所述饵料中虾塘藻每次的饲喂量为(1×104)?(2×104)3 3cell/mL，浓缩小球藻每次的饲喂量为(1×10)?(2×10)cel/mL，即虾塘藻的饲喂量与浓缩小球藻的饲喂量的数量比为10:1。[0013] 优选的，所述塑料板为多层塑料板；两层塑料板之间的层间距为12cm。[0014] 优选的，所述西施舌稚过程中，饵料的饲喂频率为2次/d，培育的温度为26.5?29.7℃。[0015] 优选的，以水的体积计，所述饵料中虾塘藻每次的饲喂量为(2×104)?(1×105)3 4cell/mL，浓缩小球藻每次的饲喂量为(2×10)?(1×10)cell/mL，即虾塘藻的饲喂量与浓缩小球藻的饲喂量的数量比为10:1。[0016] 优选的，所述催产包括阴干结合流水刺激的步骤。[0017] 优选的，所述阴干的时间为3?4h；所述流水刺激的时间为0.5?1h。[0018] 进一步优选的，所述人工繁育方法适用于湛江。[0019] 进一步优选的，所述人工繁育的季节为春秋两季。[0020] 本发明公开了以下技术效果：[0021] 本发明以湛江徐闻海域采捕的3?4龄西施舌为亲贝，经阴干?流水刺激成功诱导亲贝排放精卵；以虾塘藻，并辅以浓缩小球藻(藻膏)作为浮游幼虫、稚贝和幼贝饵料；采用封闭育苗模式进行浮游幼虫和稚贝的培育；采用“附着板+池底”附苗模式进行采苗；采用“封闭育苗”模式进行稚贝培育。本发明突破了双壳类传统育苗方法，证实虾塘藻，并辅以浓缩小球藻(藻膏)能够满足西施舌浮游幼虫、稚贝和幼贝对饵料的需要，“附着板+池底”附苗模式减少了育苗池有害物质的累积，避免冲洗底质和换底对苗种的损伤，能够取得较好的采苗效果，“封闭育苗”模式适于作为西施舌从浮游幼虫至幼贝的培育模式，不仅能够节省大量的劳力、水电，而且能够避免换水和倒池对西施舌贝苗的损伤。本发明具体实施例的结果表明：采用本发明所述养殖方法，亲贝经过诱导、受精和孵化，获总卵量4536.99万粒，受精率达到87.01±2.57％，获受精卵3947.63万粒；D形幼虫3631.41万粒，孵化率达到91.99±3.46％；浮游幼虫壳长生长速度9.92±0.26μm/d，壳高生长速度10.19±0.41μm/d，浮游幼虫的存活率84.26±3.78％；经12?17d培育，浮游幼虫完成附着变态，形成初期稚贝，稚贝壳长生长速度101.33±5.36μm/d，壳高生长速度96.37±4.47μm/d；从初期稚贝开始，经30d的培育，获得出池稚贝617.34万粒，稚贝成活率17.00±1.93％；出池稚贝经过约45d的培育，获得西施舌中培苗(幼贝)257.99万粒，中培成活率为41.79±2.51％。附图说明[0022] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。[0023] 图1为不同日龄浮游幼虫的壳长和壳高；[0024] 图2为不同日龄稚贝的壳长和壳高；[0025] 图3为不同时期西施舌的生长情况，其中1为亲贝(110.81±4.79cm)×(83±2.35cm)；2为亲贝阴干；3为流水刺激；4为初期面盘幼虫(D形幼虫)(83±2.81μm)×(70±1.96μm)；5为附着幼虫(272±10.01μm)×(253±9.67μm)；6为出池稚贝(3.26±0.12mm)×(3.10±0.09mm)；7为雌性亲贝；8为雄性亲贝；9为卵裂期(四细胞期)；10为卵裂期(八细胞期)；11为囊胚期；12为壳顶初期面盘幼虫(130±3.67μm)×(120±3.24μm)；13为壳顶中期面盘幼虫(165±5.79μm×146±4.83μm)；14为壳顶后期面盘幼虫(246±8.20μm)×(230±7.75μm)；15为匍匐幼虫(263±8.96μm)×249±7.42μm)；16为单水管期稚贝(509±44.21μm)×(443±39.97μm)；17为双水管期稚贝(750±50.86μm)×(660±45.32μm)；18为中培苗(幼贝)(2.15±0.07cm)×2.04±0.03cm)；OV为卵巢；TE为精巢；CF为棒状足；OP为出水管；IP为入水管。具体实施方式[0026] 现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。[0027] 应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。[0028] 除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。[0029] 在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。[0030] 关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。[0031] 实施例1[0032] 1、亲贝的选择与处理[0033] 2023年4月7日，于徐闻新寮镇后海外罗港海域采捕自然海区3?4龄的西施舌，抽样观察亲贝(图3中的1)性腺发育情况，具体步骤为：抽样15个亲贝，解剖观察西施舌生殖腺发育情况表明，亲贝生殖腺发育至成熟期的个体达到73％，肉眼可鉴别西施舌为雌雄异体，雌性生殖腺呈乳白色(图3中的7)，雄性生殖腺呈米黄色(图3中的8)，生殖腺分布在内脏的两侧和腹足基部横纹肌的间隙中，呈树枝状分叉，每一分支的生殖腺像一串串葡萄，末端膨胀成为滤泡。[0034] 之后挑选体壮、贝壳无创伤、健康的个体为亲贝，壳长110.81±4.79cm，壳高83±2.35cm，体重186.21±9.07g，(图3中的1)，运至雷州覃斗镇流沙村贝类育苗。⒓醇觳樵耸湓斐晌魇┥嗟乃鹕饲榭，湛江徐闻新寮镇后海外罗港海域采捕自然海区3?4龄的西施舌亲贝从采捕地点到育苗场的运输中造成亲贝的损伤较。耸涑苫盥蚀96％。[0035] 之后将损伤亲贝剔除。由于刚采捕的亲贝，壳表面和外套腔内存留大量泥沙，将亲贝置于水槽中，清洁贝壳表面，亲贝在水中自然排出体内泥沙，每30min换水一次，直至亲贝完全将体内泥沙排出。[0036] 2、亲贝的催产与孵化[0037] 西施舌亲贝露空时双壳紧闭，很难观察生殖腺颜色，从外表难以区分雌雄亲贝，催产采用雌雄个体混合诱导，阴干?流水刺激亲贝排放精卵。首先阴干3?4h(图3中的2)，将亲贝置于塑料筐(规格：26cm×19cm×8cm)中，然后将装有亲贝的塑料筐吊挂于2.8m×8m×1.8m(实际水深1.6m)的4个育苗池中，吊挂于水面下20cm处，采用潜水泵和加大充气流水刺激0.5?1h(图3中的3)，亲贝便可排放精卵，当卵子的密度达到8?10个/mL，将雌性亲贝取出，置于其它水池继续排放。亲贝排放时控制精子密度，雄贝排放精子呈烟雾状排出，发现多个雄贝同时排放时，可适当取出部分雄贝，置于其它水池继续排放，避免精子数量过多。西施舌受精卵直径50?60μm，个体较。灰紫绰，因此受精结束后胚胎在原池孵化，不洗卵，池水中施加青霉素，使池水中青霉素的浓度为1ppm，抑制池水中细菌繁殖。孵化期间水温25.5?26.5℃，盐度27?28，pH7.9?8.1，保持微波状连续充气，池水中施加EDTA?2Na5ppm。催产和孵化结束后统计总卵量、受精率和孵化率。受精率与孵化率测定，其中，卵子受精的标志是卵细胞周围出现受精膜，并在受精膜下方出现极体，孵化指受精卵经卵裂、胚胎发育形成初期面盘幼虫(D形幼虫)的过程。随机选择3个育苗池，在每个育苗池取样3个点(将3个点的样品混合成1个样品)，通过视野法分别求出受精率和孵化率，以平均值±标准差(n＝3)表示，即受精率＝受精卵/总卵数×100％，孵化率＝D形幼虫/受精卵×100％。[0038] 表1西施舌诱导、受精与孵化效果[0039] 项目 总卵量(万粒) 受精率(％) 受精卵(万粒) 孵化率(％) D形幼虫(万粒)效果(数量) 4536.99 87.01±2.57 3947.63 91.99±3.46 3631.41[0040] 本实施例结合阴干流水刺激，对健康亲贝诱导排精放卵。结果如表1所示，总卵量为4536.99万粒，受精率达到87.01±2.57％，共获受精卵3947.63万粒。水温25.5?26.5℃条件下，西施舌受精卵经过胚胎发育阶段(图3中的9?11)，发育至初期面盘幼虫(D型幼虫，图3中的4)，孵化时间20?22h，孵化率达到91.99±3.46％，共获D形幼虫3631.41万粒。[0041] 3、幼虫的培育与附着[0042] 西施舌胚胎发育到初期面盘幼虫(D型幼虫)(图3中的4)开始选优，采用350目筛绢网拖取上层D形幼虫，或通过虹吸法选取中上层幼虫，剩余D型幼虫在原池继续培育，连续33次完成选优操作。选优后幼虫置于规格为(2.8×8×1.8)m(实际水深1.6m)育苗池中，幼虫培育密度2?3个/mL。幼虫培育期间，自然水温变动范围25.5?27.5℃，盐度27?28，pH7.9?8.1，保持微波状连续充气，每天投喂虾塘藻，辅以浓缩小球藻，早晚各一次，其中虾塘藻每4 4 3次的投喂量为1×10 ?2×10 cell/mL，浓缩小球藻(藻膏)每次的投喂量为1×10 ?2×310cell/mL，保持池水淡淡的藻色，并在投喂2h后水色变清，可视为幼虫摄食正常。幼虫培育期间采用封闭育苗模式，全程不换水、不倒池，隔天适量投喂光合细菌或硝化细菌(10?20ppm)。[0043] 幼虫培育期间，每天测定幼虫生长(壳长、壳高)和密度，检查幼虫的摄食和健康状况和饵料的质量状况，监测水温、盐度等环境指标，隔日适量施用一次光合细菌和硝化细菌。当幼虫的眼点和平衡囊出现，足开始形成，标志着幼虫进入附着变态期，西施舌幼虫眼点在足神经节背方和足基部两侧，在光学显微镜下观察，伸足爬行时眼点清晰可见，当观察到幼虫出现眼点达到30％时开始采苗，采用“附着板+池底”附苗模式进行采苗，附着板为黑色塑料板，规格30cm×30cm，10片一组串联而成，层间距12cm，池底不铺设任何底质(无底质)。[0044] 幼虫壳长与壳高生长的测定的方法为：壳长指贝壳前后两端的最大距离，壳高指贝壳壳顶到腹缘的最大距离，每次测量30个幼虫的壳长和壳高，计算生长速度，以平均值±标准差(n＝30)表示，计算公式为：生长速度＝(现有幼虫长度－初始幼虫长度)/时间。初期面盘幼虫，统计水池中幼虫密度，经过12?17天，幼虫即将附着变态时，统计水池中幼虫密度，计算存活率，求平均值，幼虫存活率为现有幼虫密度与初始幼虫密度的百分比，随机选择3个育苗池，在每个育苗池取样3个点(将3个点的样品混合成1个样品)，计算公式为：存活率＝现有幼虫密度/初始幼虫密度×100％，以平均值±标准差(n＝3)。[0045] 自然水温变动范围25.5?27.5℃条件下，采用封闭育苗模式进行浮游幼虫培育，浮游幼虫壳长、壳高的生长如图1所示，幼虫壳长生长速度9.92±0.26μm/d，壳高生长速度10.19±0.41μm/d。浮游幼虫的存活率84.26±3.78％。经12?17天，浮游幼虫的发育依次经过壳顶初期面盘幼虫(图3中的12)、壳顶中期面盘幼虫(图3中的13)、壳顶后期面盘幼虫(图3中的14)和匍匐幼虫(图3中的15)，进入附着变态期(图3中的5)，西施舌幼虫完成附着变态，形成初期稚贝，此时稚贝规格达到(279±14.25)μm×(257±11.73)μm。[0046] 4、稚贝的培育与出池[0047] 附着变态的初期稚贝，贝壳无色透明，出水管呈薄膜状，足棒状，能分泌足丝，在黑色附着板上清晰可见(图3中的5)，刚附着的稚贝，足丝脆弱，不要碰触附着板和随意将附着板提离水面，充气时，气石尽量避开附着板，避免外界干扰导致稚贝脱板。附着变态初期的稚贝，7?10天后开始陆续脱板，进入池底生活。稚贝培育期间采用“无底质封闭育苗”模式，全程不换水、不倒池，池底不铺设任何底质。稚贝培育水温26.5?28℃，盐度27?28，pH7.9?8.1，保持微波状连续充气，每天投喂虾塘藻，辅以浓缩小球藻(藻膏)，早晚各一次，其中虾4 4塘藻每次的投喂量为投喂量2×10?3×10cell/mL，浓缩小球藻(藻膏)每次的投喂量为2×3 310?3×10cell/mL，投喂2h后观察水色，水色变清表明稚贝摄食正常。[0048] 每天虹吸池底稚贝，检查稚贝的摄食、生长和健康状况，检查饵料的质量状况，监测水温、盐度等环境指标，隔日适量施用一次光合细菌和硝化细菌(10?20ppm)。初期稚贝经过约25天的培育，稚贝平均壳长达到2mm以上即可出池(图3中的6)，用20目的筛绢网将稚贝苗种筛分成两种规格，按照不同规格进行苗种的中间培育。稚贝出池后统计稚贝数量和稚贝成活率。稚贝壳长与壳高生长的测定和数据统计同幼虫。培育结束后，统计稚贝的成活率，稚贝成活率为出池稚贝数量与D形幼虫的百分比，随机选择3个育苗池，统计每个水池的出池稚贝数量和D型幼虫数量，稚贝成活率以平均值±标准差(n＝3)表示，稚贝成活率＝出池稚贝/D形幼虫×100％；从初期稚贝开始，30天的培育后，统计稚贝数量。稚贝的壳长、壳高、稚贝数量和成活率详见表2，不同日龄稚贝的生长情况见图2。[0049] 表2西施舌稚贝培育效果[0050][0051] 在自然水温26.5?28℃条件下，单水管期稚贝的壳长为509±44.21μm，壳高为443±39.97μm(图3中的16)，双水管期稚贝的壳长为750±50.86μm，壳高为660±45.32μm(图3中的17)，出池稚贝的壳长为3.26±0.12mm，壳高为3.10±0.09mm，稚贝数量为617.34万粒，成活率为17.00±1.93％(表2)。稚贝的生长如图2所示，稚贝壳长生长速度101.33±5.36μm/d，壳高生长速度96.37±4.47μm/d。[0052] 5、稚贝的中间培育与下海[0053] 西施舌的中间培育即在室内育苗池将出池稚贝(壳长不低于2mm)培育至壳长超过3 22cm幼贝的过程。中间培育使用20个水泥池(规格2.8m×8m×1.8m，m)，培育密度1.3粒/cm，每池投稚贝苗数量约30万粒。中间培育期间采用“无底质封闭育苗”模式，全程不换水、不倒池，池底不铺设任何底质。自然水温变动范围27.5?29.7℃，盐度26?28，pH7.9?8.1，保持微波状连续充气，每天投喂虾塘藻，辅以浓缩小球藻(藻膏)，早晚各一次，其中虾塘藻每次的4 5 3投喂量为投喂量5×10 ?1×10cell/mL，浓缩小球藻(藻膏)每次的投喂量为5×10 ?1×410cell/mL。每天检查贝苗的摄食、生长和健康状况，监测水温、盐度等环境指标，检查饵料的质量状况，隔日适量施用一次光合细菌和硝化细菌(10?20ppm)。出池稚贝经过约45天的培育，平均壳长达到2cm以上，即可出池下海，中间培育阶段完成。出池的中培苗(幼贝)下海前，统计出苗数量，计算中培成活率。中培成活率为中间培育的幼贝数量与出池稚贝数量的百分比，中培成活率的统计同稚贝，中培成活率＝幼贝/出池稚贝×100％。统计结果为：在自然水温变动范围27.5?29.7℃条件下，出池稚贝经过约45天的培育，获得壳长2.15±0.07cm、壳高2.04±0.03cm的西施舌中培苗(幼贝)257.99万粒(图3中的18)，中培成活率为41.79±2.51％。[0054] 西施舌性别属雌雄异体，雌性生殖腺呈乳白色，雄性呈米黄色。生殖腺分布在内脏的两侧和腹足基部横纹肌的间隙中，呈树枝状分叉，末端膨胀成为滤泡。西施舌属易受精型贝类，卵细胞染色体时相发育至初期卵母细胞即可受精，因此通过解剖法和诱导法均可人工受精，获得受精卵。对湛江沿海西施舌性腺组织学观察发现，生殖腺发育处于生长期和成熟期，为4月上旬至7月中旬、9月上旬至10月中旬，因此，湛江沿海西施舌繁殖季节为春秋两季。本发明开展了西施舌春季的人工繁育，于4月初在湛江徐闻海域采捕西施舌亲贝，通过解剖观察西施舌生殖腺发育情况，亲贝生殖腺发育至成熟期的个体达到73％，湛江沿海西施舌繁殖期较福建沿海提前1个月，较山东沿海提前2个月。由于每年7月份湛江沿海常温育苗水温经常达到30℃，甚至超过30℃，高温成为导致人工育苗失败的主要原因，因此，湛江沿海西施舌人工育苗宜选择在4月份进行，7月份高温到来之前完成苗种的出池下海。虽然，通过解剖法可以实现人工受精，获得受精卵，但是会损耗大量亲贝，从西施舌资源保护角度，本发明采用了诱导催产法，即结合阴干?流水刺激，采集西施舌总卵量4536.99万粒，平均受精率为87.01％，获受精卵3947.63万粒。在水温25.5?26.5℃条件下，西施舌胚胎发育，从受精开始，经过卵裂期、囊胚期、担轮幼虫期，约20?22h发育至D形幼虫，平均孵化率达到91.99％，获D形幼虫3631.41万粒。对亲贝第一次催产之后，本发明开展了亲贝再促熟培育，促熟15天后对亲贝进行第二次催产，虽然受精、孵化比较正常，然而浮游幼虫阶段，幼虫规格差异明显，死亡率比较高，亲贝再促熟后的第二次人工繁育未能取得成功，可能与第二次催产获得的精卵质量较差有关，关于西施舌性腺多次成熟多次产卵在苗种生产上的应用有待进一步研究。本发明以诱导法获得的西施舌第一批卵开展人工孵化取得成功，从西施舌苗种规模化生产角度，建议采集第一批卵，可获取高质量的精卵细胞。[0055] 过去传统的双壳贝类人工育苗中，通常沿海普遍开展单胞藻饵料生物的培养，该工作成为了育苗工作的重要部分，生产中通常要培养3?5种单胞藻饵料，如金藻、角毛藻、扁藻、小球藻、巴夫藻等，单胞藻饵料的成功培养，为各种双壳贝类的规模化生产提供了可靠保障。然而，近年来湛江沿海贝类人工育苗，开始普遍使用虾塘藻，辅以小球藻制成的藻膏，饵料生物培养工作的这一改变为贝类人工育苗节省大量成本，包括人力、场地和水电等。过去的单胞藻饵料培养，在人力上需要技术员1名，工人2?3人，饵料培养中，包括保种(一级培养)、藻种扩培(二级培养)，以及生产性单胞藻培养(三级培养)需要占用育苗场约20％空间。此外，湛江沿海，每年5月中下旬已经进入高温季节，饵料的保种、扩培和生产性培养难度加大，时常出现饵料污染、死亡等现象，难以满足贝类苗种规模化生产。湛江对虾产业比较发达，贝类苗场周边沿海有着丰富的虾塘资源，对虾养殖过程中，虾塘中的残饵，以及对虾排泄的粪便，极易使虾塘中浮游植物大量繁殖，并且不受高温的影响，形成丰富的虾塘藻。[0056] 以鲜活的小球藻制成的藻膏，已进入商业化生产模式，该研究从当地购买藻膏，冰箱冷冻保存(保质期1年)，藻膏的使用，不仅取用方便，而且防止过多的藻液进入贝苗池，特别在稚贝和中培过程中，可为贝苗培育提供充足的饵料。[0057] 西施舌属典型埋栖生活贝类，同其它埋栖生活贝类类似，在进入埋栖生活前，通过分泌足丝附着在外物上开始一段短暂的附着生活。在过去的研究中，研究人员通常以砂盘或池底铺沙作为附着基进行采苗，取得了较好的采苗效果，而以塑料板作为附着基进行采苗，在生产上较少使用，仅见陈素文等以塑料板作为西施舌附着基质进行采苗的初步试验，证实塑料板采苗比铺砂采苗效果好，研究进一步发现塑料板采苗对西施舌稚贝后期生长不利，认为后期死亡率高的原因是附苗量大而换水量小。[0058] 本发明采用“附着板+池底”附苗模式对西施舌进行生产性采苗，附着板附苗使用的是珍珠贝采苗常用的黑色塑料板，池底附苗是在池底不铺设细砂，西施舌附着期幼虫直接在池底附着的采苗方法。研究发现，西施舌附着幼虫经过7?10天的附着生活后，开始脱离附着基进入池底生活，由于池底不铺设细砂，稚贝借助腹足在池底自由匍匐和滑行运动。传统的西施舌育苗中，以砂盘或池底铺砂模式进行稚贝培育，随着西施舌稚贝个体的长大，将持续加大投饵量以满足稚贝的摄食，随着时间延长，稚贝的排泄物(粪便和粘液)、残饵和水体中其它有机质等在砂层中不断沉积、腐败，砂层内部发黑并产生硫化氢臭味，底质出现恶化，导致稚贝无法适应底内生活而钻出砂面，甚至引起贝苗大量死亡，采取的措施通常是定期洗底，以及在底质恶化前彻底更换新砂，该操作除了工作量比较大之外，由于西施稚贝壳质薄而脆，冲洗和换底对稚贝壳体极易造成损伤，降低出苗率。本发明采用“附着板+池底”附苗模式，不仅减少了育苗池有害物质的累积，而且避免了冲洗和换底对苗种的损伤，研究取得了较好的效果，稚贝平均成活率17.00％，获出池稚贝617.34万粒,中培平均成活率41.79％，获西施舌中培苗257.99万粒。[0059] 在双壳贝类幼虫和稚贝培育中，维持育苗池水生态系统的稳定，是育苗成功的关键。在传统的贝类育苗中，浮游幼虫培育阶段，通常采用每天换水1?2次，每次换水1/3?1/2，并且5?7天倒池一次，到稚贝阶段，随着稚贝摄食量不断增大，稚贝排泄物不断增加，通常改用大换水(每天全池更换新水)和流水培育模式，旨在保持良好的水质。近年来，越来越倾向使用“封闭育苗”模式，“封闭育苗”，即一池水育一池苗。双壳贝类育苗过程中，换水容易引起贝苗的应激死亡，导致育苗失败，而“封闭育苗”是在整个育苗过程中不换水、不倒池，通过使用光合细菌和硝化细菌等微生态制剂调节水质，保持池水微生物生态平衡，促进贝苗健康生长。[0060] 北方沿海在双壳贝类育苗中仍然采用换水、倒池和流水培育方法，取得较好的育苗效果，可开展高密度人工育苗，幼虫培育密度可达到10?20个/ml，然而在南方沿海，换水育苗的成功率很低，这可能与南方和北方的气候，特别是温度引起水质的差异有关。该研究采用“封闭育苗”模式，进行了西施舌从浮游幼虫至幼贝的培育，获得较好的育苗效果，该方法不仅节省了大量的劳力、水电，而且避免了对西施舌贝苗的损伤。本发明“封闭育苗”不宜进行高密度育苗，幼虫培育密度2?3个/mL为宜。[0061] 本发明以湛江徐闻海域采捕的3?4龄西施舌为亲贝，经阴干?流水刺激诱导亲贝排放精卵。以虾塘藻，并辅以浓缩小球藻(藻膏)作为浮游幼虫、稚贝和幼贝饵料。采用封闭育苗模式进行浮游幼虫和稚贝的培育，采用“附着板+池底”附苗模式进行采苗，采用“封闭育苗”模式进行稚贝培育。结果表明，亲贝经过诱导、受精和孵化，获总卵量4536.99万粒，受精率达到87.01±2.57％，获受精卵3947.63万粒。水温25.5?26.5℃，20?22h后西施舌受精卵经过胚胎发育阶段发育至初期面盘幼虫(D型幼虫)，获D形幼虫3631.41万粒，孵化率达到91.99±3.46％。水温25.5?27.5℃，浮游幼虫壳长生长速度9.92±0.26μm/d，壳高生长速度10.19±0.41μm/d，浮游幼虫的存活率84.26±3.78％。经12?17d，浮游幼虫完成附着变态，形成初期稚贝。稚贝发育经过单水管期稚贝(509±44.21)μm×(443±39.97)μm和双水管期稚贝(750±50.86)μm×(660±45.32)μm，水温26.5?28℃下稚贝壳长生长速度101.33±5.36μm/d，壳高生长速度96.37±4.47μm/d。从初期稚贝开始，经30d的培育，获得(3.26±0.12)mm×(3.10±0.09)mm的出池稚贝617.34万粒，稚贝成活率17.00±1.93％。水温27.5?29.7℃下，出池稚贝经过约45d的培育，获得(2.15±0.07)cm×(2.04±0.03)cm的西施舌中培苗(幼贝)257.99万粒，中培成活率为41.79±2.51％。该研究突破了双壳类传统育苗方法，证实虾塘藻，并辅以浓缩小球藻(藻膏)能够满足西施舌浮游幼虫、稚贝和幼贝对饵料的需要，“附着板+池底”附苗模式可以取得较好的采苗效果，“封闭育苗”模式适于作为西施舌从浮游幼虫至幼贝的培育模式。[0062] 以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

专利地区：广东

专利申请日期：2024-01-31

专利公开日期：2024-11-29

专利公告号：CN117898226B