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专利名称：一种简单胶质头菌及其应用

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202410941895.2

专利申请（专利权）人：江苏农林职业技术学院
权利人地址：江苏省镇江市句容市文昌东路19号

专利发明（设计）人：陈佳佳,彭金凤,潘静霞,于健,黄晓潇,付丹阳,孙亚亚,吴项乾,李松,秦方,赵昌浩

专利摘要：本发明公开了一种简单胶质头菌及其应用，所述简单胶质头菌(Gliocephalotrichum?simplex)的菌株号为JSAFC?1759，于2024年05月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC?No.41306。本申请通过对枫香周围土壤分离纯化获得了1种简单胶质头菌(Gliocephalotrichum?simplex)。该菌株可作为生防菌株对迷宫栓孔菌有抑制活性，平板对峙培养抑制率达88.46％；同时，该菌株能够促枫香发育，调控植株生长，对于未来防治木腐病生防菌剂开发具有重大的意义。

主权利要求：
1.一种简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)，其特征在于，所述简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)的菌株号为JSAFC1759，于2024年05月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.41306。
2.根据权利要求1所述的简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)，其特征在于，所述简单胶质头菌的ITS基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，His基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。
3.一种生防菌菌剂，其特征在于，所述生防菌菌剂的活性成分为权利要求1～2任一项所述的简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)。
4.权利要求1～2任一项所述的简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)、权利要求3所述的生防菌菌剂在抑制迷宫栓孔菌生长中的应用。
5.权利要求1～2任一项所述的简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)、权利要求3所述的生防菌菌剂在促进枫香生长方面的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用具体为通过用简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)JSAFC1759的孢子悬浮液对枫香进行灌根来促进枫香的株高生长。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述孢子悬浮液的制备方法为：(1)取生防菌简单胶质头菌JSAFC1759菌种，在无菌条件下，用接种针挑取菌丝，接入已灭菌的PDA培养基，培养5?7天；(2)无菌条件下，刮取菌丝，用无菌水冲洗菌丝并用纱布过滤；(3)无菌条件下，用无菌水调整孢子浓度即可。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述培养条件为25℃、65％湿度、暗培养。
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9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述孢子悬浮液的浓度为10/ml。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述孢子悬浮液施用量为5mL/次/2天，持续30天。 说明书 : 一种简单胶质头菌及其应用技术领域[0001] 本发明属于微生物技术领域，涉及一种简单胶质头菌及其应用。背景技术[0002] 枫香别名枫木、枫树、路路通等，是我国重要的乡土观赏树种。枫香具有较高的经济价值，其木材纹理美观、淡红色，结构细，易加工，可作建筑、家具、茶叶箱及包装箱材。此外，枫香以树形高大，树冠浓阴，秋叶红艳可作风景林种植，为著名的红叶观赏树种。因此人工营造枫香林，经济效益显著。然而，病害的发生往往会对枫香的生长造成严重影响，迷宫栓孔菌(Trametesgibbosa)引发的木腐病主要为害枫香的枝干和心材，致芯材腐朽，呈轮纹状、染病树木质部变白疏松，质软且脆，腐朽易碎，常引致树势衰弱，叶色变黄或过早落叶。[0003] 目前化学农药是常用的植物病害防治方法，但长期使用会使许多病原菌产生抗药性，降低防病效果，频繁、高浓度地使用会污染环境，超标的残毒还会威胁人类健康。植物周围环境中存在着许多有益微生物，这些微生物不仅不会使植物致。行┥踔聊芄挥盏贾参锊剐，提高植物在生物胁迫或非生物胁迫条件下的生存能力。此外，这些微生物来源于自然环境，对环境无污染，使用这些微生物防治植物病有利于保持生态平衡。发明内容[0004] 发明目的：本发明的目的是提供了一种简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)，以及其在抑制迷宫栓孔菌生长和促进枫香生长方面的应用。[0005] 技术方案：本发明提供了一种简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)，所述简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)的菌株号为JSAFC1759，于2024年05月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.41306。[0006] 进一步地，所述简单胶质头菌的ITS基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，His基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。[0007] 本发明还提供了一种生防菌菌剂，所述生防菌菌剂的活性成分为上述的简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)。[0008] 本发明还提供了上述简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)、生防菌菌剂在抑制迷宫栓孔菌生长中的应用。[0009] 本发明还提供了上述简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)、生防菌菌剂在促进枫香生长方面的应用。[0010] 进一步地，所述应用具体为通过用简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)JSAFC1759的孢子悬浮液对枫香进行灌根来促进枫香的株高生长。[0011] 进一步地，所述孢子悬浮液的制备方法为：(1)取生防菌简单胶质头菌JSAFC1759菌种，在无菌条件下，用接种针挑取菌丝，接入已灭菌的PDA培养基，培养5?7天；(2)无菌条件下，刮取菌丝，用无菌水冲洗菌丝并用纱布过滤；(3)无菌条件下，用无菌水调整孢子浓度即可。[0012] 进一步地，步骤(1)中所述培养条件为25℃、65％湿度、暗培养。[0013] 进一步地，所述孢子悬浮液的浓度为105/ml。[0014] 进一步地，所述孢子悬浮液施用量为5mL/次/2天，持续30天。[0015] 有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下突出的显著优点：本申请通过对枫香周围土壤分离纯化获得了1种简单胶质头菌(Gliocephalotrichumsimplex)。该菌株可作为生防菌株对迷宫栓孔菌有抑制活性，平板对峙培养抑制率达88.46％；同时，该菌株能够促枫香发育，调控植株生长，对于未来防治木腐病生防菌剂开发具有重大的意义。附图说明[0016] 图1：GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759的系统发育树。[0017] 图2：本发明的生防菌GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759与迷宫栓孔菌对峙培养。[0018] 图3：为本发明的生防菌GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759对枫香生长的影响。具体实施方式[0019] 下面结合附图对本发明的技术方案作进一步说明。[0020] 本发明中所述，术语“生防菌”指有益微生物，可以防治植物病害，主要有细菌、真菌、放线菌。[0021] 实施例1：GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759的分离、鉴定[0022] 1、GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759的分离[0023] 取广东云浮市枫香生长状况较好的土壤，从中分离获得JSAFC1759，菌落特征如下：在PDA平板培养基上培养，菌落生长迅速，呈稀疏絮状，其表面的颜色呈白色，底部颜色为黄褐色。[0024] 2、GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759分子生物学鉴定[0025] (1)采用TIANGEN公司的试剂盒提取菌株JSAFC1759的基因组DNA。[0026] (2)分别扩增基因组DNA的ITS和His基因。DNA扩增采用30μL的反应体积，包含15μL2×EasyTaq PCR SuperMix(+dye)，引物对ITS1(SEQ ID NO.3：5’?CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA?3’)&ITS4(SEQIDNO.4：5’?TCCTCCGCTTATTGATATGC?3’)、CYLH3F(SEQIDNO.5：5’?AGGTCCACTGGTGGCAAG?3’)&CYLH3R(SEQIDNO.6：5’?AGCTGGATGTCCTTGGACTG?3’)各1μL(10μM)，2μL模板DNA和11μLddH2O，PCR扩增程序条件如下：94℃预变性5min；94℃变性30s，54℃退火45s(His基因52℃)，72℃延伸60s，共35个循环；最后72℃延伸10min。[0027] (3)扩增所得PCR产物经过1％琼脂糖凝胶电泳后，紫外灯下观察，将有目标条带的PCR产物送至南京擎科生物开云优惠体育网页版入口有限公司测序，测序结果为：菌株JSAFC1759的ITS基因序列为SEQIDNO.1(CCTCCCAACCCATGTGAATTTACCTTTACGTTCCCTCGGCGGCGTTCCCCTCGGGGTTCCCGCCAGAGGACCAACAAACCCTTTGAATTTATTAGTATTATTCTGAGTGATTTAATCAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCCGGGCTTGGTGTTGGAGGTCGGCACAAGCGTCCCTCGGGTCGCCGCCGTCTCCCAAATATAGTGGCGGTCTCGCTGTAGCCTCCTCTGCGTAGTAACTCACCTCGCACTGGAACGCGGCGCGGCCAAGCCGTTAAACCCCCCACTTCTGAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTT)，His基因序列为SEQIDNO.2(AAGGCCCCTCGTAAGCAGCTTGCTTCCAAGGCTGGTAAGTCATCTACTCCCATCTCATCCATCATGGTCACCATCAAGGCCATGGTGGTTGTCTACTGCTGCCGTCGACATCGCGGCTAACATCCTCTCTCCTAGCCCGCAAGAGCGCCCCCTCCACCGGAGGTGTCAAGAAGCCTCACCGCTACAAGCCCGGTACCGTCGCTCTCCGTGAGATTCGTCGCTACCAGAAGTCCACTGAGCTTCTCATCCGCAAGCTCCCCTTCCAGCGTCTCGTAAGTGCCCAACGCGACACAAAACACTTTACGCGCCCTCGCACAGTCATACTAACGCGCCAACAACAGGTCCGTGAGATTGCCCAGGACTTCAAGAGCGACCTCCGTTTCCAGTCCTCTGCCATCGGTGCTCTCCAGGAGTCCGTCGAGTCTTACCTCGTCTCCCTCTTCGAGGACACCAACCTCTGCGCCATCCACGCCAAGCGTGTCACCATCCAGTCCAA)。[0028] (4)在NCBI数据库网站上比对SEQIDNO.1和SEQIDNO.2序列并建立系统发育进化树，参见图1。比对结果如表1所示。根据表1结果可以推定本发明的生防菌JSAFC1759为Gliocephalotrichumsimplex，命名为GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759，并将所述菌株于2024年05月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.41306，分类命名为GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759，保藏地址为北京市朝阳区北辰1号院3号中国科学院微生物研究所。[0029] 表1SEQIDNO.1和SEQIDNO.2序列比对结果[0030][0031] 实施例2：GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759对迷宫栓孔菌的抑制效果[0032] (1)在超净工作台上将迷宫栓孔菌JSAFC1020的直径为4mm菌饼接种到PDA培养基平板的一侧作为对照组，同时将GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759的直径为4mm菌饼接种到PDA培养基的对称一侧作为实验组；并用只接种迷宫栓孔菌的培养基平板作为对照组。[0033] (2)将步骤(1)的实验组和对照组培养基于25℃的恒温培养箱中倒置培养，培养条件为光照8h，接着黑暗培养16h。[0034] (3)将步骤(2)的实验组和对照组培养基按上述培养条件人工培养7天后，用平板对峙法法分别测量迷宫栓孔菌菌落半径，并观察GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759对迷宫栓孔菌的抑制效果。[0035] 结果如图2所示，空白对照组的迷宫栓孔菌菌落半径为3.12cm；实验组中，经用平板对峙法测定，迷宫栓孔菌病原的平均半径仅为0.36cm，抑制率达88.46％，表明GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759对迷宫栓孔菌的抑制效果显著。[0036] 实施例3：GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759对枫香生长的影响[0037] (1)用打孔器取1块直径5mm大的菌株GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759的菌丝块接种于直径9cm的培养皿中(内含15mlPDA培养基)，25℃、65％湿度条件下避光培养7天。[0038] (2)将培养7天的GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759在无菌条件下，刮取5菌丝，用无菌水冲洗菌丝并用纱布过滤，之后再调整孢子浓度为10/ml。[0039] (3)选择直径为12cm的盆钵，向每个盆钵中移栽1株长势一致的健康枫香苗(品种为沙红)，试验设置2组(对照组和处理组)，每个处理设置10个重复。对照组为：每个盆钵浇灌5mL的GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759孢子悬浮液；实验组为：每个盆钵浇灌5mL的无菌水。[0040] (4)每2天浇灌各组枫香苗，30天后统计枫香的株高，观察枫香苗根部生长发育情况。[0041] 结果如图3和表2所示。[0042] 表2枫香株高统计结果[0043][0044] 其中，表中株高的数值表达方式为：平均值±标准误差。[0045] 从图3和表2数据可知，实验组的株高和根部发育明显优于对照组，可见GliocephalotrichumsimplexJSAFC1759对枫香生长有促进作用。

专利地区：江苏

专利申请日期：2024-07-15

专利公开日期：2024-11-29

专利公告号：CN118652771B