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专利名称：一种黄精多糖组合物及其制备方法和应用

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202211546636.7

专利申请（专利权）人：黄山学院
权利人地址：安徽省黄山市屯溪区西海路39号

专利发明（设计）人：柯仲成,方辉平,孙银宇,李长江,史建俊,孙光映,贾佳,赵曼婷

专利摘要：本发明公开了一种黄精多糖组合物及其制备方法和应用，涉及中药技术领域，所述黄精多糖组合物是由黄精饮片为原料，分离纯化得到黄精多糖，再与白芨葡萄糖甘露聚糖混合获得的，所述黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖的质量比为1:0.8?1.2，另外公开了其制备方法和应用；本发明将黄精多糖与与白芨葡萄糖甘露聚糖按照比例复配得到黄精多糖组合物，经功能性便秘模型幼鼠及临床应用研究证明，能明显改善粪便外观、质量和含水量、胃肠道功能指标、肠推进功能等指标，为治疗小儿便秘提供了较好的方法。

主权利要求：
1.一种黄精多糖组合物，其特征在于，所述黄精多糖组合物的制备方法包括以下步骤：（1）黄精饮片粉碎后过筛得粉料，粉料经石油醚加热脱脂后过滤，取滤渣，干燥得到黄精渣；
（2）选择75%乙醇作为提取剂，与步骤（1）得到的黄精渣进行混合，在常温下进行超高压提。玫胶凭嗵堑幕旌弦，离心取上相溶液经75%乙醇回流提。崛∫壕涠掣稍，得到黄精粗多糖，超高压提取的工艺参数为：提取压力100?200MPa，保压时间5?10min，料液比1:5?10g/mL；
（3）使用DHP100大孔树脂对步骤（2）得到的黄精粗多糖进行脱色，再经DEAE纤维素柱分离得到黄精多糖；
（4）将步骤（3）得到的黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖按照质量比为1:0.8?1.2混合均匀即可得到黄精多糖组合物。
2.根据权利要求1所述的黄精多糖组合物，其特征在于，所述步骤（3）中，经脱色处理后的黄精粗多糖在DEAE纤维素柱分离过程中，分别利用蒸馏水和0.1、1.0mol/LNaCl溶液洗脱获得黄精多糖PSP1、黄精多糖PSP2及黄精多糖PSP3。
3.根据权利要求1所述的黄精多糖组合物，其特征在于，所述步骤（4）之后，将黄精多糖组合物加水中，加热至75?85℃使其充分溶解后，加入凝胶剂后混匀，入模具，冷却脱：蟾稍，凝胶剂的添加量为黄精多糖组合物质量的1?2%。
4.根据权利要求3所述的黄精多糖组合物，其特征在于，所述凝胶剂为卡拉胶或魔芋胶中的至少一种。
5.一种如权利要求1?4任一所述的黄精多糖组合物在制备防治小儿便秘药物中的应用。 说明书 : 一种黄精多糖组合物及其制备方法和应用技术领域[0001] 本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种黄精多糖组合物及其制备方法和应用。背景技术[0002] 黄精属百合科，是滇黄精、多花黄精等的根茎，黄精中含有多种营养物质与活性成分，如甾体皂苷类、多糖类、黄酮类、生物碱类、醌类、挥发油、氨基酸、微量元素等，因而具有调节免疫、提高学习记忆力、抗氧化、抗疲劳、保护心血管系统、降血糖血脂、抗癌抗肿瘤、治疗骨质疏松、改善造血功能等多种药理作用，其中，黄精多糖是黄精中起主要作用的活性成分；[0003] 目前对黄精多糖的研究主要是在药理药性及食用价值方面，一方面，扩展黄浆多糖的应用范围具有较高的现实意义，另一方面，如何从提取工艺出发提高黄精多糖的提纯效果是扩展黄精多糖的应用范围至关重要的一环。发明内容[0004] 本发明的目的就在于为了解决上述问题，提供一种黄精多糖组合物及其制备方法和应用，以提供一种新的制备方法以提高黄精多糖纯度，同时该黄精多糖组合物还可用于防治小儿便秘。[0005] 本发明通过以下技术方案来实现上述目的：[0006] 本发明提供了一种黄精多糖组合物，所述黄精多糖组合物是由黄精饮片为原料，分离纯化得到黄精多糖，再与白芨葡萄糖甘露聚糖混合获得的，所述黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖的质量比为1:0.8?1.2。[0007] 作为本发明的进一步优化方案，所述白芨葡萄糖甘露聚糖，按照重量份计，由甘露糖和葡萄糖以4:1聚合而成的。[0008] 本发明还提供了如上述任一所述的一种黄精多糖组合物在制备防治小儿便秘药物中的应用，所述防治小儿便秘药物为口服软糖。[0009] 本发明还提供了一种黄精多糖组合物的制备方法，包括以下步骤：[0010] (1)黄精饮片粉碎后过筛得粉料，粉料经石油醚加热脱脂后过滤，取滤渣，干燥得到黄精渣；[0011] (2)选择75％乙醇作为提取剂，与步骤(1)得到的黄精渣进行混合，在常温下进行超高压提。玫胶凭嗵堑幕旌弦，离心取上相溶液经75％乙醇回流提。崛∫壕涠掣稍，得到黄精粗多糖；[0012] (3)使用DHP100大孔树脂对步骤(2)得到的黄精粗多糖进行脱色后再利用DEAE纤维素柱分离黄精多糖，得到黄精多糖；[0013] (4)将步骤(3)得到的黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖按照配方量混合均匀即可得到黄精多糖组合物。[0014] 作为本发明的进一步优化方案，所述步骤(1)中，超高压提取的工艺参数为：提取压力100?200MPa，保压时间5?10min，料液比1:5?10g/ml。[0015] 作为本发明的进一步优化方案，所述步骤(1)中，所述步骤(3)中，经脱色处理后的黄精粗多糖在DEAE纤维素柱分离过程中，分别利用蒸馏水和0.1、1.0mol/LNaCl溶液洗脱获得黄精多糖PSP1、PSP2及PSP3。[0016] 作为本发明的进一步优化方案，所述步骤(4)之后，将黄精多糖组合物加水中，加热至75?85℃使其充分溶解后，加入凝胶剂后混匀，入模具，冷却脱：蟾稍锏玫交凭硖，凝胶剂的添加量为黄精多糖组合物质量的1?2％。[0017] 作为本发明的进一步优化方案，所述胶凝剂为卡拉胶或黄原胶中的至少一种。[0018] 本发明的有益效果在于：[0019] (1)本发明利用超高压提取、乙醇回流提取相结合的方式处理黄精原料能够显著提高黄精多糖的纯度及得率。[0020] (2)本发明将黄精多糖与与白芨葡萄糖甘露聚糖按照比例复配得到黄精多糖组合物，经功能性便秘模型幼鼠及临床应用研究证明，能明显改善粪便外观、质量和含水量、胃肠道功能指标、肠推进功能等指标，为治疗小儿便秘提供了较好的方法。[0021] (3)将黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖复配能够在一定程度上降低黄精软糖加工时凝胶剂的使用量，具有一定的积极意义。具体实施方式[0022] 下面对本发明作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。[0023] 一、材料[0024] 本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。[0025] 二、方法[0026] 1、黄精多糖的提取分离[0027] (1)黄精饮片粉碎后过筛得粉料，粉料经石油醚加热脱脂后过滤，取滤渣，干燥得到黄精渣；[0028] (2)选择75％乙醇作为提取剂，与步骤(1)得到的黄精渣进行混合，在常温下进行超高压提。崛⊙沽100?200MPa，保压时间5?10min，料液比1:5?10g/ml，得到含黄精多糖的混合液，离心取下相沉淀用无水乙醇润洗后与上相溶液合并经75％乙醇回流提。崛∫壕涠掣稍，得到黄精粗多糖；[0029] (3)使用DHP100大孔树脂对步骤(2)得到的黄精粗多糖进行脱色，冷冻干燥得到黄精多糖，再利用DEAE纤维素柱分离黄精多糖，得到黄精多糖；[0030] 其中，脱色步骤为，称取20gDHP100大孔树脂，加入5mg·mL?1黄精粗多糖溶液100mL，静态吸附24h，收集大孔树脂，转移至100纯化水中，恒温振荡24h，收集解吸液后，再加入100纯化水，恒温振荡24h后，过滤，合并滤液，冷冻干燥，得黄精多糖；[0031] 分离黄精多糖的步骤，利用DEAE纤维素柱，柱体积200mL，上样黄精多糖200mg，分别用蒸馏水和0.1、1.0mol/LNaCl溶液洗脱1个柱体积，洗脱速度为0.5mL/min，每管收集5mL，合并分别获得黄精多糖PSP1、PSP2及PSP3。[0032] 2、黄精多糖组合物的制备[0033] 黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖按照比例混合均匀即可得到黄精多糖组合物，所述黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖的质量比为1:0.8?1.2。[0034] 3、黄精软糖的制备[0035] 将黄精多糖组合物加水中，加热至75?85℃使其充分溶解后，加入凝胶剂后混匀，入模具，冷却脱：蟾稍锏玫交凭硖，凝胶剂的添加量为黄精多糖组合物质量的1?2％，胶凝剂为卡拉胶或黄原胶中的至少一种，另外，为了增加适口性可相应选择合适的辅料。[0036] 三、验证试验[0037] 1、为了验证提取分离方法对黄精多糖的纯度及得率的影响，设置以下实施例：[0038] 实施例1[0039] (1)黄精饮片粉碎后过筛得粉料，粉料经石油醚加热脱脂后过滤，取滤渣，干燥得到黄精渣；[0040] (2)选择75％乙醇作为提取剂，与步骤(1)得到的黄精渣进行混合，在常温下进行超高压提。崛⊙沽100MPa，保压时间10min，料液比1:5g/ml，得到含黄精多糖的混合液，离心取下相沉淀用无水乙醇润洗后与上相溶液合并经75％乙醇回流提。崛∫壕涠掣稍，得到黄精粗多糖；[0041] (3)使用DHP100大孔树脂对步骤(2)得到的黄精粗多糖进行脱色，冷冻干燥得到黄精多糖，再利用DEAE纤维素柱分离黄精多糖，得到黄精多糖；[0042] 其中，脱色步骤为，称取20gDHP100大孔树脂，加入5mg·mL?1黄精粗多糖溶液100mL，静态吸附24h，收集大孔树脂，转移至100纯化水中，恒温振荡24h，收集解吸液后，再加入100纯化水，恒温振荡24h后，过滤，合并滤液，冷冻干燥，得黄精多糖；[0043] 分离黄精多糖的步骤，利用DEAE纤维素柱，柱体积200mL，上样黄精多糖200mg，分别用蒸馏水和0.1、1.0mol/LNaCl溶液洗脱1个柱体积，洗脱速度为0.5mL/min，每管收集5mL，合并分别获得黄精多糖PSP1、PSP2及PSP3。[0044] 实施例2[0045] 与实施例1不同之处在于步骤(2)，选择75％乙醇作为提取剂，与步骤(1)得到的黄精渣进行混合，在常温下进行超高压提。崛⊙沽200MPa，保压时间5min，料液比1:10g/ml，得到含黄精多糖的混合液，离心取下相沉淀用无水乙醇润洗后与上相溶液合并经75％乙醇回流提。崛∫壕涠掣稍，得到黄精粗多糖。[0046] 其余步骤同实施例1。[0047] 实施例3[0048] 与实施例1不同之处在于步骤(2)，选择75％乙醇作为提取剂，与步骤(1)得到的黄精渣进行混合，在常温下进行超高压提。崛⊙沽200MPa，保压时间10min，料液比1:5g/ml，得到含黄精多糖的混合液，离心取下相沉淀用无水乙醇润洗后与上相溶液合并经75％乙醇回流提。崛∫壕涠掣稍，得到黄精粗多糖。[0049] 其余步骤同实施例1。[0050] 实施例4[0051] 与实施例1不同之处在于步骤(2)，75％乙醇回流提取2次，滤渣煎煮2次，合并滤液，浓缩，加95％乙醇调整乙醇浓度为75％，4℃冰箱冷藏12h，离心取沉淀，用无水乙醇润洗两次，冷冻干燥后，加水溶解，加入2％木瓜蛋白酶，调pH值7.0，设置温度60℃，酶解60min后，Sevage法脱蛋白2次，冷冻干燥，得黄精粗多糖。[0052] 其余步骤同实施例1。[0053] 对照组1[0054] 与实施例2不同之处在于步骤(2)，选择75％乙醇作为提取剂，与步骤(1)得到的黄精渣进行混合，在常温下进行常压浸泡提取24h，得到含黄精多糖的混合液，离心取下相沉淀用无水乙醇润洗后与上相溶液合并经75％乙醇回流提。崛∫壕涠掣稍，得到黄精粗多糖。[0055] 其余步骤同实施例1。[0056] 分别检测实施例1?4及对照组1的黄精粗多糖的纯度及得率，黄精多糖PSP1、PSP2、PSP3的纯度及得率，结果如表1所示：[0057] 表1.结果统计表[0058][0059] 根据表1结果显示，实施例1?3相比于实施例4及对照组1，采用超高压提取配合乙醇回流提取的方式，提取得到的黄精多糖PSP1、PSP2及PSP3的纯度及得率要好。[0060] 2、黄精多糖及黄精多糖组合物对幼鼠便秘治疗作用[0061] 为了验证黄精多糖及黄精多糖组合物对幼鼠便秘治疗作用，设置以下对比例：[0062] 对比例1[0063] 在实施例3的基础上，将黄精多糖PSP2与白芨葡萄糖甘露聚糖按照配方量混合均匀即可得到黄精多糖组合物，所述黄精多糖PSP2与白芨葡萄糖甘露聚糖的质量比为1:0.8，记为黄精多糖组合物1。[0064] 对比例2[0065] 在实施例3的基础上，将黄精多糖PSP2与白芨葡萄糖甘露聚糖按照配方量混合均匀即可得到黄精多糖组合物，所述黄精多糖PSP2与白芨葡萄糖甘露聚糖的质量比为1:1，记为黄精多糖组合物2。[0066] 对比例3[0067] 在实施例3的基础上，将黄精多糖PSP3与白芨葡萄糖甘露聚糖按照配方量混合均匀即可得到黄精多糖组合物，所述黄精多糖PSP3与白芨葡萄糖甘露聚糖的质量比为1:1.2，记为黄精多糖组合物3。[0068] 2.1、分组与给药[0069] 将54只21日龄SD雌性幼鼠(80g左右)适应性饲养1周，喂养标准饲料，自由饮水。给药前一天称量每只幼鼠的体重，按体重随机分组，共分为9组，每组6只，即：空白组，模型组，阳性对照组，PSP1、PSP2、PSP3，对比例1、对比例2、对比例3。按照分组分笼饲养。随机取6只幼鼠作为空白组，剩余48只幼鼠分别给予10mg/kg·d复方地芬诺酯灌胃，连续14d，确定造模成功后，随机分成模型组，阳性组，PSP1组、PSP2组、PSP3组、对比例1、对比例2、对比例3。阳性对照组按每日剂量灌服麻仁丸0.6g/kg，PSP1、PSP2、PSP3组分别给予0.6g/kgPSP1、PSP2、PSP3，灌胃体积2mL，对比例1、对比例2、对比例3分别给予0.6g/kg黄精多糖组合物1、黄精多糖组合物2、黄精多糖组合物3，灌胃体积2mL，正常组、模型组灌服等量生理盐水，连续灌胃3d。[0070] 2.2、幼鼠粪便外观、质量和含水量测定[0071] 收集各组幼鼠粪便，观察外观，记录12h粪便粒数，称定湿粪质量，干燥至恒重，称定干粪质量，计算其含水率。[0072] 2.3、胃肠道功能指标分析[0073] 取羧甲基纤维素溶于蒸馏水中，制备高分子溶液，分次加入活性炭粉末，搅拌均匀，配成约0.1g/mL的活性炭高分子溶液，冷藏备用。[0074] 3d治疗结束后，各组幼鼠禁食不禁水，于第4d每鼠灌服活性炭高分子溶液，30min后用10％的水合氯醛进行麻醉，腹主动脉取血，室温下放置30min，3000r/min离心10min，得到幼鼠血清，测定MTL、GAS、SS、NO等含量。[0075] 2.4、幼鼠肠推进功能测定[0076] 剖开腹腔，将幼鼠自幽门至直肠末端完整取出，自然伸直平铺，在无张力状态下测量幽门至直肠距离，并记录碳末的前沿到幽门的距离，计算碳末推进百分率。[0077] 2.5、结果分析[0078] 表2.幼鼠粪便外观、质量和含水量测定结果[0079][0080] 注：与正常组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05。[0081] 表3.胃肠道功能指标分析结果[0082][0083] 注：与正常组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05。[0084] 表4.幼鼠肠推进功能测定[0085][0086][0087] 注：与正常组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05。[0088] 结果表明，经过功能性便秘模型幼鼠，发现黄精多糖PSP1、PSP2、PSP3以及黄精多糖组合物1、黄精多糖组合物2、黄精多糖组合物3都能明显改善粪便外观、质量和含水量、胃肠道功能指标、肠推进功能等指标，具有较好的治疗幼鼠便秘，但黄精多糖组合物1、黄精多糖组合物2、黄精多糖组合物3的效果还要优于黄精多糖PSP1、PSP2、PSP3，另外，黄精多糖组合物2即黄精多糖PSP2与白芨葡萄糖甘露聚糖的质量比为1:1时，效果最佳。[0089] 3、黄精多糖及黄精多糖组合物治疗小儿便秘的应用研究[0090] 3.1、患者资料[0091] 80例患儿，年龄为1?4岁，平均2岁3个月；男42例，女38例；病程最短0.5个月，最长半年，平均2个月，均为功能性便秘，无器质性病变。按照随机原则，分为治疗一组20例、治疗二组20例、治疗三组20例和对照组20例，四组患儿一般资料具有可比性。[0092] 纳入标准：至少符合下列2项条件并持续半个月：①每周排便2次或＜2次；②有排便疼痛或排便困难史；③有大量粪潴留史；④排出粪便粗大，以致于难于压碎；⑤直肠内有巨大粪块。[0093] 3.2、治疗方法[0094] 所有患儿采用对症治疗，主要通过调节饮食，多食膳食纤维、蜂蜜，辅以药物如开塞露、液体石蜡等，适量补充水分，每日适当活动，训练按时排便习惯等。[0095] 治疗一组患儿服黄精多糖PSP2，治疗二组服用黄精组合物2，加水温水溶解后口服，治疗三组服用黄精软糖(每块黄精软糖所含黄精组合物2的质量为1g)，每次1g，3次/d，7天为1个疗程，连用4个疗程。[0096] 3.3、疗效判断标准[0097] 显效：排便间隔时间＜48h，排便不费力，大便性状正常，伴随症状消失，28天时形成正常的排便习惯；好转：排便间隔时间一般＜48h，偶在48～72h内稍费力即可排出，大便性状基本正常，伴随症状改善28天时对排便无恐惧感；无效：仍出现便秘大便干结，需借助物理方法排出，伴随症状无改善1个月时排便习惯同前。经治疗1个疗程排便无变化。便秘伴随症状的改善以缓解率表示，缓解率是指便秘伴随症状在治疗2周末较治疗前减低的患者数与治疗前有此症状的患者数之比。[0098] 采用SPSS19.0统计软件进行数据处理，P＜0.05表明组间存在显著性差异。[0099] 3.4、治疗结果[0100] 治疗一组20例中显效11例(55.0％)，好转7例(40.0％)，无效2例(5.0％)，总有效率为90％。[0101] 治疗二组20例中显效13例(65.0％)、好转6例(30.0％)，无效1例(5.0％)，总有效率为95％。[0102] 治疗三组20例中显效12例(60.0％)、好转7例(35.0％)，无效1例(5.0％)，总有效率为95％。[0103] 对照组20例中显效6例(30.0％)，好转7例(35.0％)，无效4例(20.0％)，总有效率85.0％。[0104] 三个治疗组显效率和总有效率均显著优于对照组(P＜0.05)，其中，治疗二组服用黄精组合物2的效果要更优于治疗一组服用黄精多糖PSP2，另外，将黄精组合物2制作成软糖供患儿食用，其治疗效果与直接服用黄精组合物2的效果相当，由此可知，将黄精组合物制成软糖来治疗小儿便秘而言，效果不受影响，而且软糖相较于直接服药，患儿接受度高。[0105] 4、黄精软糖的加工应用[0106] 为了验证白芨葡萄糖甘露聚糖在黄精软糖加工应用的作用效果，设置以下对比例：[0107] 对比例4[0108] 在对比例2的基础上，将100g黄精多糖组合物2加热水溶解后，加入凝胶剂后入模具，冷却脱：蟾稍锏玫交凭硖，凝胶剂的添加量为黄精多糖组合物质量的1％，凝胶剂为卡拉胶。[0109] 对比例5[0110] 在对比例2的基础上，将100g黄精多糖组合物2加热水溶解后，加入凝胶剂后入模具，冷却脱：蟾稍锏玫交凭硖，凝胶剂的添加量为黄精多糖组合物质量的2％，凝胶剂为卡拉胶。[0111] 对比例6[0112] 在对比例2的基础上，将100g黄精多糖组合物2加热水溶解后，加入凝胶剂后入模具，冷却脱：蟾稍锏玫交凭硖，凝胶剂的添加量为黄精多糖组合物质量的2％，凝胶剂为黄原胶和卡拉胶等质量混合。[0113] 对比例7[0114] 在实施例3的基础上，将100g黄精多糖PSP2加热水溶解后，加入凝胶剂后入模具，冷却脱：蟾稍锏玫交凭硖，凝胶剂的添加量为黄精多糖组合物质量的10％，凝胶剂为卡拉胶。[0115] 取相同大小的对比例4?7的黄精软糖，形状为立方体，依次进行质构性质的检测，即全质构分析TPA测试：用质构仪测定其质地，参数设定为探头P/50R：操作模式：测试前速度1mm/s、测试速度0.5mm/s、测试后速度0.5mm/s、测试距离45％(样品厚度百分数)、停留时间5s、触发力5g.重复测试5次，测定参数：硬度、粘度、弹性以及咀嚼性，结果如表5所示；[0116] 表5.结果分析表[0117][0118] 结果证明，本申请将黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖复配得到的黄精多糖组合物制成黄精软糖，其具有较好的弹性和咀嚼性，成型良好不软塌，另外，对比例4?6与对比例7相比，可以看出将黄精多糖与白芨葡萄糖甘露聚糖复配能够在一定程度上降低黄精软糖加工时凝胶剂的使用量，具有一定的积极意义。[0119] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

专利地区：安徽

专利申请日期：2022-12-05

专利公开日期：2024-10-29

专利公告号：CN115770252B