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专利名称：一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202311535232.2

专利申请（专利权）人：雅安市质量检验检测院(雅安市食品药品检验所),雅安市农产品质量监测检验中心
权利人地址：四川省雅安市雨城区大兴街道国家茶检中心

专利发明（设计）人：发明人:郑云华,曾艳,蒋文隆,白春蓉,李霞雪

专利摘要：一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法，具体步骤如下：S1、称取指定重量的茶样放入离心装置，加入一定比例的水，进行涡旋混匀，再加入乙酸?乙腈，并静置30分钟待用；S2、向离心装置中加入无水硫酸镁和醋酸钠进行离心；S3、吸取离心装置中液体于针筒过滤管中压出澄清液；S4、将澄清液氮吹至进干并加入丙酮进行复溶；S5、将复溶溶液过有机滤膜后得到标准溶液待用；S6、将标准溶液分别过色谱仪与质谱仪测定对应农药残留浓度。本发明解决了9种除草剂农药之前没有合适检测方法的问题。

主权利要求：
1.一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法，其特征在于，具体步骤如下：S1、准确称取2g茶叶试样于50mL离心管中，加入10mL水，涡旋混匀，加入15ml乙酸?乙腈，涡旋混匀后静置30min；
S2加入6g无水硫酸镁，1.5g醋酸纳，4000r/min离心3min；
S3准确吸取1.6mL离心装置中的液体于针筒过滤管中，压出澄清液；
S4对澄清液氮吹至近干，并加入0.8ml丙酮进行复溶；
S5将复溶溶液过有机滤膜后得到标准溶液待用；
S6将标准溶液分别过色谱?质谱联用仪测定对应除草剂残留浓度；
所述S6步骤中色谱仪条件为：
进样口温度：280℃，不分流进样，进样量：1μL；恒流模式，流量为1.0mL/min；TG?5SILMS毛细管色谱柱，规格：30m*0.25mm*0.25μm；柱箱升温程序：80℃，保持0分钟，以60℃/min升温至170℃，保持0分钟；最后以25℃/min升温至260℃，保持5分钟；
所述S6步骤中质谱仪条件为：电子轰击源：70eV；离子源温度：300℃；传输线温度：280℃；多反应监测；
所述S1步骤中乙酸?乙腈加入前需要放在零下18度冷冻10分钟，所述S3步骤针筒过滤管最大体积为2ml，所述S3步骤中的针筒过滤管中装有由50mgLPAS、50mgPSA?N、50mgFeN?MWCNTs、150mgMgSO4配置的溶液，所述的除草剂包括草枯醚、氟除草醚、三氟硝草醚、灭草环、抑草蓬、氯酞酸甲酯、茚草酮、西玛津和莠去津。 说明书 : 一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法技术领域[0001] 本发明涉及一种成分检测领域，具体涉及一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法。背景技术[0002] 雅安藏茶，原名南路边茶，自唐代茶马互市兴起，因其独特的文化魅力优势，雅安一直承担着供应少数民族地区茶叶的重任，雅安藏茶也成为了藏族同胞的生命之茶和民生之茶。[0003] 我国最新版《食品安开云优惠体育网页版入口家标准食品中农药最大残留限量》(GB2763—2021)中对茶叶中除草剂农药的残留限量指标有20项，GB2763—2021推荐的气相色谱分离的检测方法标准中，其中草枯醚、氟除草醚、尚未有规定的检测方法。灭草环、抑草蓬、氯酞酸甲酯、茚草酮指定的是果蔬或者是粮谷的参考方法，而非茶叶的检测方法。西玛津、莠去津、三氟硝草醚虽然有茶叶检测方法，但是暂无9种除草剂农药高通量同时检测的方法。[0004] 为了解决上述问题，申请人提出一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法。发明内容[0005] 本发明的目的在于提供一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法，以解决现有技术中的问题。[0006] 为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法，其特征在于，具体步骤如下：[0007] S1、准确称取2g茶叶试样于50mL离心管中，加入10mL水，涡旋混匀，加入15ml乙酸?乙腈，涡旋混匀后静置30min；[0008] S2加入6g无水硫酸镁，1.5g醋酸纳，4000r/min离心3min。[0009] S3准确吸取1.6mL茶叶提取液于2mL含50mgLPAS、50mgPSA?N、50mgFeN?MWCNTs、150mgMgSO4的针筒过滤管中，压出澄清液，[0010] S4氮吹至近干，加入0.8ml丙酮复溶，将得到的溶液过0.22μm有机滤膜过滤之后得到标准溶液用于进行测定。[0011] S5、将复溶溶液过有机滤膜后得到标准溶液待用；[0012] S6、将标准溶液分别过色谱?质谱联用仪测定对应农药残留浓度；所述S6步骤中色谱仪条件为：[0013] 进样口温度：280℃，不分流进样，进样量：1μL；恒流模式，流量为1.0mL/min；TG?5SILMS毛细管色谱柱，规格：30m*0.25mm*0.25μm；柱箱升温程序：80℃，保持0分钟，以60℃/min升温至170℃，保持0分钟；最后以25℃/min升温至260℃，保持5分钟；[0014] 所述S6步骤中质谱仪条件为：电子轰击源：70eV；离子源温度：300℃；传输线温度：280℃；多反应监测；[0015] 所述S1步骤中乙酸?乙腈加入前需要放在零下18度冷冻10分钟，所述S3步骤针筒过滤管最大体积为2ml，所述S3步骤中的针筒过滤管中装有由50mgLPAS、50mgPSA?N、50mgFeN?MWCNTs、150mgMgSO4配置的溶液，所述的农药包括草枯醚、氟除草醚、三氟硝草醚、灭草环、抑草蓬、氯酞酸甲酯、茚草酮、西玛津和莠去津。[0016] 有益效果：1、通过采用本发明的检测方法，补充了草枯醚、氟除草醚可使用的检测方法，解决了草枯醚、氟除草醚没有检测方法的问题。[0017] 2、通过采用本发明的检测方法，补充了灭草环、抑草蓬、氯酞酸甲酯、茚草酮专用检测方法，解决了灭草环、抑草蓬、氯酞酸甲酯、茚草酮只能采用果蔬和粮谷检测方法的问题。[0018] 3、通过采用本发明的检测方法，通过统一的溶液预处理，解决了草枯醚、氟除草醚、三氟硝草醚、灭草环、抑草蓬、氯酞酸甲酯、茚草酮、西玛津、莠去津9种除草剂农药同时检测的问题。附图说明[0019] 图1为本发明实施例中的提取溶剂对回收率的影响；[0020] 图2为本发明实施例中的前处理温度对回收率的影响；[0021] 图3为本发明实施例中的过柱体积对回收率的影响；[0022] 图4为本发明实施例中的FeN?MWCNTs添加量与回收率关系图；[0023] 图5为本发明实施例中的9种农药多反应监测(MRM)质量色谱图。具体实施方式[0024] 以下参考说明书附图介绍本发明的优选实施方式，使其技术内容更加清楚和便于理解。本发明可以通过许多不同形式的实施方式来得以体现，本发明的保护范围并非仅限于文中提到的实施方式。[0025] 实施例1[0026] 一种快速测定雅安藏茶中九种除草剂残留量的方法，具体步骤如下：S1、准确称取2g茶叶试样于50mL离心管中，加入10mL水，涡旋混匀，加入15ml乙酸?乙腈，涡旋混匀后静置30min；[0027] S2加入6g无水硫酸镁，1.5g醋酸纳，4000r/min离心3min。[0028] S3准确吸取1.6mL茶叶提取液于2mL含(50mgLPAS、50mgPSA?N、50mgFeN?MWCNTs、150mgMgSO4)的针筒过滤管中，压出澄清液，[0029] S4氮吹至近干，加入0.8ml丙酮复溶，将得到的溶液过0.22μm有机滤膜过滤之后得到标准溶液用于进行测定。[0030] 本发明中色谱仪条件为：[0031] 进样口温度：280℃，不分流进样，进样量：1μL；恒流模式，流量为1.0mL/min；TG?5SILMS毛细管色谱柱，规格：30m*0.25mm*0.25μm；柱箱升温程序：80℃(0min),以60℃/min升温至170℃(0min)；最后以25℃/min升温至260℃(5min)。[0032] 本发明中质谱仪条件为：电子轰击源：70eV；离子源温度：300℃；传输线温度：280℃；多反应监测(MRM)。[0033] 在合适的质量数范围内，分别对10.0mg/L的9种农药标准溶液进行全扫描；选择质量数较大并且响应较高的离子进行二级碎裂，采用AutoMRM软件对二级碎裂碰撞电压进行优化。9种农药定量离子对、定性离子对及碰撞能量见表1。[0034] 表19种农药的保留时间、定量离子对、定性离子对和碰撞能量[0035][0036][0037] 如图1所示本发明实施例中根据待测农药的极性和溶解程度，试验选择了实验室常用的几种溶剂乙腈、正己烷?丙酮(7:3)和乙酸乙酯来分析，将添加有20μg/kg9种农药的藏茶按照以上方法进行提取净化后上机检测，结果发现，使用正己烷?丙酮(7:3)提取时提取液的颜色较深，提取的色素等共提取杂质较多将不利于后续净化，使用乙酸乙酯作为提取溶剂时，灭草环，抑草蓬等目标物不能充分提取出来，而乙腈可以在不共萃取大量亲脂物质的情况下提取范围最广的有机化合物，有研究表明加入乙酸的弱酸性乙腈提取稳定性明显高于中性条件下，因此最终优选0.5％乙酸?乙腈作为最终提取溶剂。[0038] 如图2所示，本实施例中用乙睛溶剂提取后，参照QuEChERS法加入内含4.0g无水硫酸镁、1.0g氯化钠、1.0g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸二钠的提取盐包。氯化钠可促进溶液分层，缓冲体系可有效防止对酸碱敏感农药的降解，无水硫酸镁在提取过程中可吸水，但是吸水会产生大量热量，影响热不稳定农药的回收率。本实验对乙酸乙腈提取液分别采取常温、?18℃冷冻10min和20min后加入缓冲体系提取试剂考察提取过程中温度对提取回收率的影响。实验结果表明，冷冻效果比常温好，冷冻10分钟和20分钟区别不明显，考虑到时间成本，最终优选冷冻10min作为本实验的研究条件。[0039] 如图3所示，试验选用的针筒过滤柱最大体积为2ml,其他条件不变，本实验考察了1ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml、1.8ml五个不同过柱体积对9种目标农残的回收率影响，试验结果表明，回收率随着过柱体积的影响会呈上升趋势，然后在1.4ml到1.8ml趋于平衡，所以最终优用1.6ml作为最终过柱体积。[0040] 本发明中，一般的检测方法采用QuEChERS前处理时，常规的吸附剂有PSA、C18和GCB.本试验在此基础上另外研究了两种新型吸附剂材料多壁碳纳米管(FeN?MWCNTs)和聚合物刷MOFs(LPAS)。结果显示，GCB具有对化合物的强烈吸附作用，并且可以无差别性地吸附非极性农药,导致部分农药的回收率降低。而多壁碳纳米管(FeN?MWCNTs)材料化学性能更稳定、生物毒素低、环保污染小、净化效果更好,LPAS和C18均具有较强的去除脂肪的能力，C18对化合物的强烈吸附作用，可以无差别性地吸附非极性农药,导致部分农药的回收率降低。LPAS比C18除脂效果更好，能够更好的净化植物蛋白，对化合物的吸附作用相对较弱，因此选用LPAS代替C18。PSA对色素的去除能力较弱，但能有效去除茶多酚、儿茶素类和糖类物质。雅安藏茶样品颜色深基质比较复杂，所以使用分散固相萃取净化时需要考虑两种或多种吸附净化剂，以更有效除去提取液中的色素、茶多酚、儿茶素和糖类等杂质成分，因此，本发明优选FeN?MWCNTs、LPAS、和PSA为净化吸附剂。[0041] 如图4所示，因雅安藏茶基质复杂，其中植物色素在检测过程中造成主要干扰，而FeN?MWCNTs的主要作用是吸附色素，所以此步骤主要考察FeN?MWCNTs的用量。为获得较好的样品净化效果，以目标物回收率为考察依据对吸附剂用量进行考察。以加标水平20μg/kg的雅安藏茶为基质，随FeN?MWCNTs的加入，大部分目标物回收率呈一定的下降趋势；其中抑草蓬和灭草环的回收率在FeN?MWCNTs的净化作用下有较大程度的变化；但在MWCNTs?COOH的用量达到20mg以上后，随着FeN?MWCNTs用量继续加大回收率变化变缓，部分农药回收率仍然较高，说明基质效应仍然明显。当FeN?MWCNTs用量为50mg时，藏茶提取液颜色为浅黄绿色，最终结合色素清除效果、回收率和经济效应，本发明优选50mgLPAS、50mgPSA?N、50mgFeN?MWCNTs、150mgMgSO4为本发明的吸附剂组合用量。[0042] 基质效应(ME)是空白基质匹配校正曲线的斜率/溶剂标准曲线的斜率﹣1。当IMEI小于20％时，表示弱基质效应可忽略不计；IME1为20％～50％时，表示中等基质效应；IMEI大于50％时表示强基质效应。结果表明，9种农药在雅安藏茶中的基质效应如图3所示，结果表明，草枯醚、莠去津、西玛津、氯酞酸甲酯在藏茶叶中为弱基质效应；其余5种农药基质效应为中等程度以上，其中抑草蓬、灭草环2种茶叶的基质效应较强，因通过净化的手段无法完全克服所有基质的基质效应，为了提高检测方法的准确性，本研究采用基质匹配校准的方法进行基质效应的补偿。[0043] 本发明按照研究建立的方法处理得空白基质溶液，配制基质标准工作溶液，按标准溶液的色谱质谱条件进行检测，得到线性方程和相关系数，以S/N＝10确定方法定量限(LOQ),相关数据见表2(线性方程为藏茶基质中获得)。结果显示，9种农药的基质标准工作液在各自范围内均呈良好的线性关系，方法定量限2?5μg/kg,9种化合物的定量限均小于等于GB2763—2021中限量要求。[0044] 本发明中对雅安藏茶空白样品进行了不同浓度的加标回收试验，样品添加混合标准溶液后，振荡混匀并静置1h,以便添加的农药能被样品充分吸收，按照前文方法进行前处理和仪器测定，平行处理6次。9种农药在不同茶叶基质中的添加浓度及平均回收率见表3，藏茶空白样品在3个水平加标回收试验中的平均回收率为80.2％?117.1％，相对标准偏差(n＝6)为2.5％?9.3％。[0045] 表29种农药的回归方程、相关系数、线性范围和定量限[0046][0047] 表39种农药3个水平添加量的平均加标回收率和相对标准偏差(n＝6)[0048][0049][0050] 经验证本发明建立了雅安藏茶中9种农药残留量的快速检测分析方法，茶叶样品经乙腈提。崛∫河肍eN?MWCNTs和PSA净化，经气相色谱?三重四级杆串联质谱仪测定，基质匹配外标法定量。建立的方法简单、快速、灵敏度高、准确度好，能满足茶叶中相关农药残留的检测要求。[0051] 以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。[0052] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

专利地区：四川

专利申请日期：2023-11-17

专利公开日期：2024-10-22

专利公告号：CN117907455B