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专利名称：一种高三尖杉酯碱及其工艺生产方法

专利类型：发明专利

专利申请号：CN202110868850.3

专利申请（专利权）人：泰华天然生物制药有限公司
权利人地址：陕西省商洛市洛南县城工业集中区

专利发明（设计）人：柳超

专利摘要：本发明公开了一种高三尖杉酯碱及其工艺生产方法，该高三尖杉酯碱是以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成，所述以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成的高三尖杉酯碱的含量大于99％，工艺生产方法包括：原材料预处理、粉碎、甲醇提取、一次减压浓缩、酸沉、萃取脱色、萃取酯碱、二次减压浓缩、柱层析洗脱、三次减压浓缩、分配层析洗脱、四次减压浓缩、溶解、蒸干及结晶等步骤，本发明提供的技术方案，制备原料取材的创新解决了现有使用三尖杉根茎及树干作为原料对高三尖杉酯碱进行提取制备而破环珍稀树种资源的技术问题，工艺生产方法的创新进一步提高了高三尖杉酯碱含量及产量，解决了现有方法制备得到的高三尖杉酯碱含量及产量较低的问题。

主权利要求：
1.一种高三尖杉酯碱的工艺生产方法，其特征在于，
所述高三尖杉酯碱是以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成，所述以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成的高三尖杉酯碱的含量大于99%；
所述工艺生产方法具体包括如下步骤：
S1：原材料预处理：将中国粗榧的枝叶按照前处理SOP程序进行处理，拣净杂质得到净料；
S2：粉碎：将步骤S1中得到的净料进行粉碎得粗粉；
S3：甲醇提。航街鑃2中的粗粉自罐顶投料口投入罐内，于罐中加入过量的95%以上的甲醇，对粗粉进行甲醇加热回流提。啻沃馗，重复提取次数为2?4次；
S4：一次减压浓缩：将步骤S3经多次甲醇回流提取得到的提取液输入列管浓缩器中进行浓缩，得到浸膏；
S5：酸沉：将步骤S4浓缩得到的浸膏倒入酸沉缸中，加入1%HCl水溶液进行酸沉处理，酸沉降完成后，收集上层清液；
S6：萃取、脱色：将步骤S5得到的酸沉上清液置于酸沉罐中，加入石油醚进行萃取、脱色，收集下层酸水液；
S7：萃取酯碱：将步骤S6得到的下层酸水液抽入萃取罐进行酯碱萃。10%的氨水将PH调至5—5.5，用氯仿进行萃。
S8：二次减压浓缩：将步骤S7萃取后得到的氯仿液进行合并，对合并的氯仿液通过无水硫酸钠干燥柱进行干燥，将干燥后的氯仿液输入浓缩罐中进行减压浓缩，得到高三尖杉总碱浸膏；
S9：柱层析洗脱：对步骤S8得到的高三尖杉总碱浸膏进行柱层析洗脱，根据有效成分及杂质的分类，得到四类洗脱液：Ⅰ类洗脱液、Ⅱ类洗脱液、Ⅲ类洗脱液、Ⅳ类洗脱液；其中，Ⅰ类洗脱液为前杂，Ⅱ类洗脱液为前交叉、Ⅲ类洗脱液为混合酯碱，Ⅳ类洗脱液为后杂；
S10：三次减压浓缩：将步骤S9中得到的分类相同的洗脱液合并，分别进行减压浓缩，最终得到四类浸膏：Ⅰ类浸膏、Ⅱ类浸膏、Ⅲ类浸膏、Ⅳ类浸膏，将Ⅱ类浸膏、Ⅲ类浸膏倒入旋转蒸发仪，进行水浴真空减压浓缩蒸干，得到Ⅱ类干膏、Ⅲ类干膏；
S11：分配层析洗脱：将步骤S10得到的Ⅲ类干膏进行分配层析洗脱，对洗脱的不同顺序得到的洗脱液进行分类、合并，分别得到三类洗脱液：Ⅲ?A类洗脱液、Ⅲ?B类洗脱液及Ⅲ?C类洗脱液；
S12：四次减压浓缩：:将步骤S11中得到的经合并的各类别的洗脱液输入浓缩器中分别进行减压浓缩，分别得到相应的Ⅲ?A浸膏、Ⅲ?B浸膏及Ⅲ?C浸膏，将A类浓缩浸膏倒入旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干，得到高三尖杉酯碱精品；
S13：溶解、蒸干及结晶:将步骤S12得到的高三尖杉酯碱精品加入丙酮进行溶解，于旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干，加入乙醚，析晶完全后，过滤，抽干收集于烧杯中，得到结晶精品，将得到的结晶精品用少量甲醇溶解，于旋转蒸发仪中进行水浴加热减压蒸发，加入乙醚，析晶完成后，得到高三尖杉酯碱结晶精品；
所述步骤S9中的柱层析洗脱具体步骤为：
（1）层析柱安装：将柱子固定于架子上，用水平尺齐方向保持垂直，再将剪好的脱脂棉、滤纸放入柱底，压平；
（2）将活度为二级的100?200目的Al2O3用氯仿拌成糊状，再缓缓倒入柱中，边倒边用软物轻轻敲击柱子，使Al2O3装填一致均匀，装完后用氯仿上、下循环1小时，使Al2O3均匀、充实；
（3）样品处理：将高三尖杉总碱浸膏加等量的氯仿搅拌使充分溶解，并拌以等量的三氧化二铝；
（4）上样：将溶解好的样品加入柱中，使拌样表面平整；
（5）洗脱：将计量缸中的氯仿换成氯仿：甲醇=100：0.5，即极性为0.5%，然后开启阀门，加入柱中，进行洗脱；
（6）控制柱下阀门，流速为1升/分钟，每5升为收集单位收集，每隔5桶用毛细管取样进行薄层层析，检测高三尖杉酯碱，跟踪、检查、归类，按有效成份和杂质可分为四类，分别为：Ⅰ类洗脱液、Ⅱ类洗脱液、Ⅲ类洗脱液、Ⅳ类洗脱液；
（7）根据检测结果，及时更换洗脱液极性，洗脱液极性梯度为0.5%、1%、2%三种，即洗脱液从Ⅰ类变Ⅱ类时，极性从0.5%→1%；从Ⅱ类变Ⅲ类时，极性从1%→2%；
所述步骤S11中分配层析洗脱的具体步骤为：
（1）装柱：将100?160目的硅胶称好，并与等量的PH=5的柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液充分研和均匀，再以氯仿适量搅拌成糊状，装于层析柱中，并用软物敲打柱体，使硅胶均匀，无勾流；
（2）样品处理：将混合酯碱用等量的氯仿溶解；
（3）上样：将样品缓缓加于柱子上端，开启柱下阀门，使其慢慢吸附，至柱上液面与硅胶面平齐；
（4）再用PH=5柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液饱和的氯仿溶液加入柱子上端，进行洗脱，流速为1升/分钟，以3升为计量收集单位，每隔5桶取样进行高三尖杉酯碱检测依据薄层层析鉴别，归类分别合并为三个部分，分别为Ⅲ?A类洗脱液、Ⅲ?B类洗脱液及Ⅲ?C类洗脱液，首先洗脱的是Ⅲ?A类：高三尖杉酯碱；中间部分是Ⅲ?B类：高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱的混和物；最后洗脱的是Ⅲ?C类：三尖杉酯碱。
2.根据权利要求1所述的一种高三尖杉酯碱的工艺生产方法，其特征在于，所述工艺生产方法还包括如下步骤：S14：真空干燥：将步骤S13得到的高三尖杉酯碱结晶精品进行真空干燥，得到高三尖杉酯碱干粉；S15：粉碎及内包装：对经步骤S14真空干燥后的高三尖杉酯碱干粉进行粉碎成细粉，按原料车间内包装岗位的标准操作程序进行包装，即完成高三尖杉酯碱的整个工艺生产过程。
3.根据权利要求1所述的一种高三尖杉酯碱的工艺生产方法，其特征在于，所述步骤S3中，95%以上甲醇的加入量为三尖杉粗粉的3?5倍，所述甲醇加热回流提取时的温度为65℃，每次回流时间为2h，重复回流提取时，95%以上甲醇的加入量为三尖杉粗粉的1?2倍，所述步骤S4中，所述减压浓缩的真空度为：0.06?0.07MPa，温度控制在40?50℃，浓缩至60℃进行热测，浸膏相对密度为1.1。
4.根据权利要求1所述的一种高三尖杉酯碱的工艺生产方法，其特征在于，
所述步骤S5酸沉步骤具体为：加入与浸膏等量的1%HCl水溶液充分搅拌溶解2小时，再加入一定量水，调节PH值至2，静置，沉降24小时以上，将上层清液抽出，下层残渣液用离心机离心，转速400RPM，使上清液与残渣分离，将上清液合并收集于不锈钢桶中，残渣弃去，步骤S6中，所述萃取、脱色具体为:向酸沉罐中加入三分之一的60?90度石油醚，充分搅拌萃取
5分钟，静置0.5h，待分层后，抽出上层石油醚层，如此进行几次萃。敝凛腿∫杭负跷奚，将下层酸水液抽入萃取罐中。
5.根据权利要求1所述的一种高三尖杉酯碱的工艺生产方法，其特征在于，
所述步骤S7的萃取酯碱具体为：将步骤S6得到的下层酸水液抽入萃取罐用10%的氨水调至PH=5—5.5，充分搅拌均匀，再加入与酸水液等体积的氯仿充分搅拌萃取5分钟，静置
0.5小时，待分层后，放出下层氯仿层，如此进行8—10次重复萃。敝谅确轮形搋ゼ罴斐鑫，所述步骤S8的二次减压浓缩步骤中，减压浓缩的温度为55?60℃，真空度为0.03MPa，减压浓缩得到的高三尖杉总碱浸膏的相对密度为1.2。 说明书 : 一种高三尖杉酯碱及其工艺生产方法技术领域[0001] 本发明涉及药物制备领域，具体的涉及一种高三尖杉酯碱及其工艺生产方法。背景技术[0002] 高三尖杉酯碱系从粗榧属植物的总生物碱中分离出的一种生物碱，存在于三尖杉属植物中，是我国研制成功的高效抗肿瘤药，1963年由Paudler等首次从日本粗榧和三尖杉中分离出粗榧碱；1969年，Powell等从柱冠粗榧中首次分离出高三尖杉酯碱，确定了其结构，90年代，被卫生部列入常用47种抗癌药之一，载入1990年版《中国药典》。临床证明对急性粒细胞白血。毙缘ズ讼赴籽。煜蛋籽〉雀髦旨毙苑橇馨托园籽〖奥粤Ｏ赴籽【薪虾昧菩，由此可看出，高三尖杉酯碱的市场发展潜力巨大，发展前景广阔。[0003] 现有常见的高三尖杉酯碱制备生产工艺主要是将三尖杉的根茎、树干、树皮制成粗粉，加入酒精提。兄惴掷，最终得到高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱，上述现有制备方法的不足之处在于：其一、三尖杉属植物为第三纪残遗种，分布星散、保存数量少，其种群组成不完整、结实量少、发芽率低，更新十分困难，加之过度采伐，导致许多种类陷入了濒危乃至灭绝的境地，使用三尖杉根茎及树干作为原料对高三尖杉酯碱进行制备，会进一步极大的破环珍稀树种资源；其二，现有制备方法所制备得到的高三尖杉酯碱的产量低，得到的产品中高三尖杉酯碱的含量也较低，不利于工业化生产。发明内容[0004] 本发明的目的在于：针对上述现有技术所述的制备高三尖杉酯碱所存在的技术问题，本发明提供了一种高三尖杉酯碱及其工艺生产方法，该高三尖杉酯碱使用中国粗榧的枝叶作为制备原料，制备原料取材的创新解决了现有使用三尖杉根茎及树干作为原料对高三尖杉酯碱进行提取制备而破环珍稀树种资源的技术问题，本发明提供的高三尖杉酯碱的工艺生产方法，生产得到的高三尖杉酯碱含量较高，进一步解决了现有制备方法制备得到的高三尖杉酯碱含量及产量较低的问题，且该发明提供的高三尖杉酯碱的工艺生产方法是在不影响树种正常生长、不破坏环境的前提下进行工业化生产。[0005] 本发明采用的技术方案如下：一种高三尖杉酯碱，所述高三尖杉酯碱是以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成，所述以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成的高三尖杉酯碱的含量大于99%。[0006] 所述高三尖杉酯碱通过以下工艺生产方法制备而成，具体步骤如下：[0007] S1：原材料预处理：将中国粗榧的枝叶按照前处理SOP程序进行处理，拣净杂质得到净料；[0008] S2：粉碎：将步骤S1中得到的净料进行粉碎得粗粉；[0009] S3：甲醇提。航街鑃2中的三尖杉粗粉自罐顶投料口投入罐内，于罐中加入过量的95%以上的甲醇，对三尖杉粗粉进行甲醇加热回流提。啻沃馗矗籟0010] S4：一次减压浓缩：将步骤S3经多次甲醇回流提取得到的提取液输入列管浓缩器中进行浓缩，得到浸膏；[0011] S5：酸沉：将步骤S4浓缩得到的浸膏倒入酸沉缸中，加入1%HCl水溶液进行酸沉处理，酸沉降完成后，收集上层清液；[0012] S6：萃取、脱色：将步骤S5得到的酸沉上清液置于酸沉罐中，加入石油醚进行萃取、脱色，收集下层酸水液；[0013] S7：萃取酯碱：将步骤S6得到的下层酸水液抽入萃取罐进行酯碱萃。10%的氨水调PH，用氯仿进行萃。籟0014] S8：二次减压浓缩：将步骤S7萃取后得到的氯仿液进行合并，对合并的氯仿液通过无水硫酸钠干燥柱进行干燥，将干燥后的氯仿液输入浓缩罐中进行减压浓缩，得到高三尖杉总碱浸膏；[0015] S9：柱层析洗脱：对步骤S8得到的高三尖杉总碱浸膏进行柱层析洗脱，根据有效成分及杂质的分类，得到四类洗脱液：Ⅰ类洗脱液、Ⅱ类洗脱液、Ⅲ类洗脱液、Ⅳ类洗脱液；[0016] S10：三次减压浓缩：将步骤S9中得到的分类相同的洗脱液合并，分别进行减压浓缩，最终得到四类浸膏：Ⅰ类浸膏、Ⅱ类浸膏、Ⅲ类浸膏、Ⅳ类浸膏，将Ⅱ类浸膏、Ⅲ类浸膏倒入旋转蒸发仪，进行水浴真空减压浓缩蒸干，得到Ⅱ类干膏、Ⅲ类干膏；[0017] S11：分配层析洗脱：将步骤S10得到的Ⅲ类干膏进行分配层析洗脱，对洗脱的不同顺序得到的洗脱液进行分类、合并，分别得到三类洗脱液：Ⅲ?A类洗脱液、Ⅲ?B类洗脱液及Ⅲ?C类洗脱液；[0018] S12：四次减压浓缩：:将步骤S11中得到的经合并的各类别的洗脱液输入浓缩器中分别进行减压浓缩，分别得到相应的Ⅲ?A浸膏、Ⅲ?B浸膏及Ⅲ?C浸膏，将A类浓缩浸膏倒入旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干，得到高三尖杉酯碱精品；[0019] S13：溶解、蒸干及结晶:将步骤S12得到的高三尖杉酯碱精品加入丙酮进行溶解，于旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干，加入乙醚，析晶完全后，过滤，抽干收集于烧杯中，得到结晶精品，将得到的结晶精品用少量甲醇溶解，于旋转蒸发仪中进行水浴加热减压蒸发，加入乙醚，析晶完成后，得到高三尖杉酯碱结晶精品；[0020] S14：真空干燥：将步骤S13得到的高三尖杉酯碱结晶精品进行真空干燥，得到高三尖杉酯碱干粉；[0021] S15：粉碎及内包装：对经步骤S14真空干燥后的高三尖杉酯碱干粉进行粉碎成细粉，按原料车间内包装岗位的标准操作程序进行包装，即完成高三尖杉酯碱的整个工艺生产过程。[0022] 进一步地，步骤S2中所述破碎的粗粉为10?20目，粉碎速度为70?100kg/小时。[0023] 进一步地，所述步骤S3中，95%以上甲醇的加入量为三尖杉粗粉的3?5倍，所述甲醇加热回流提取时的温度为65℃，每次回流时间为2h，重复回流提取时，95%以上甲醇的加入量为三尖杉粗粉的1?2倍，重复提取次数为2?4次。[0024] 进一步地，步骤S4中，所述减压浓缩的真空度为：0.06?0.07MPa，温度控制在40?50℃，浓缩至60℃进行热测，浸膏相对密度为1.1。[0025] 进一步地，步骤S5酸沉步骤具体为：加入与浸膏等量的1%HCl水溶液充分搅拌溶解2小时，再加入一定量水，调节PH值至2，静置，沉降24小时以上，将上层清液抽出，下层残渣液用离心机离心，转速400RPM，使上清液与残渣分离，将上清液合并收集于不锈钢桶中，残渣弃去。[0026] 进一步地，步骤S6中，所述萃取、脱色具体为:向酸沉罐中加入三分之一的60?90度石油醚，充分搅拌萃取5分钟，静置0.5h，待分层后，抽出上层石油醚层，如此进行几次萃。敝凛腿∫杭负跷奚，将下层酸水液抽入萃取罐中。[0027] 进一步地，所述步骤S7的萃取酯碱具体为：将步骤S6得到的下层酸水液抽入萃取罐用10%的氨水调至PH=5—5.5，充分搅拌均匀，再加入与酸水液等体积的氯仿充分搅拌萃取5分钟，静置0.5小时，待分层后，放出下层氯仿层，如此进行8—10次重复萃。敝谅确轮形搋ゼ罴斐鑫。[0028] 进一步地，所述步骤S8的二次减压浓缩步骤中，减压浓缩的温度为55?60℃，真空度为0.03MPA，减压浓缩得到的高三尖杉总碱浸膏的相对密度为1.2。[0029] 进一步地，所述步骤S9中的柱层析洗脱具体步骤为：[0030] （1）层析柱安装：将柱子固定于架子上，用水平尺齐方向保持垂直，再将剪好的脱脂棉、滤纸放入柱底，压平；[0031] （2）将活度为二级的100?200目的Al2O3用氯仿拌成糊状，再缓缓倒入柱中，边倒边用软物轻轻敲击柱子，使Al2O3装填一致均匀，装完后用氯仿上、下循环1小时，使Al2O3均匀、充实；[0032] （3）样品处理：将高三尖杉总碱浸膏加等量的氯仿搅拌使充分溶解，并拌以等量的三氧化二铝；[0033] （4）上样：将溶解好的样品加入柱中，使拌样表面平整；[0034] （5）洗脱：将计量缸中的氯仿换成氯仿：甲醇=100：0.5，即极性为0.5%，然后开启阀门，加入柱中，进行洗脱；[0035] （6）控制柱下阀门，流速约为1升/分钟，约每5升为收集单位收集，每隔5桶用毛细管取样进行薄层层析，检测高三尖杉酯碱，跟踪、检查、归类，按有效成份和杂质可分为四类，分别为：Ⅰ类洗脱液、Ⅱ类洗脱液、Ⅲ类洗脱液、Ⅳ类洗脱液。所述Ⅰ类洗脱液为前杂，即无有效成份，只有杂质；所述Ⅱ类洗脱液为前交叉，既有有效成份又有杂质；所述Ⅲ类洗脱液为混合酯碱，几乎全部为有效成份；所述Ⅳ类洗脱液为后杂，即无有效成份，只有杂质；[0036] （7）根据检测结果，及时更换洗脱液极性，洗脱液极性梯度为0.5%、1%、2%三种，即洗脱液从Ⅰ类变Ⅱ类时，极性从0.5%→1%；从Ⅱ类变Ⅲ类时，极性从1%→2%。[0037] 进一步地，所述步骤S10的三次减压浓缩步骤中，减压浓缩的温度为55?60℃，真空度为0.03MPA，减压浓缩至60℃热测时，浸膏的相对密度为1:1即可，所述水浴真空减压浓缩蒸干的温度为55?60℃，时间为0.5?1小时.[0038] 进一步地，所述步骤S11中分配层析洗脱的具体步骤为：[0039] （1）装柱：将100?160目的硅胶称好，并与等量的PH=5的柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液充分研和均匀，再以氯仿适量搅拌成糊状，装于层析柱中，并用软物敲打柱体，使硅胶均匀，无勾流；[0040] （2）样品处理：将混合酯碱用等量的氯仿溶解；[0041] （3）上样：将样品缓缓加于柱子上端，开启柱下阀门，使其慢慢吸附，至柱上液面与硅胶面平齐；[0042] （4）再用PH=5柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液饱和的氯仿溶液加入柱子上端，进行洗脱，流速为1升/分钟，以3升为计量收集单位，每隔5桶取样进行高三尖杉酯碱检测依据薄层层析鉴别，归类分别合并为三个部分，分别为Ⅲ?A类洗脱液、Ⅲ?B类洗脱液及Ⅲ?C类洗脱液，所述Ⅲ?A类洗脱液为高三尖杉酯碱，I所述Ⅲ?B类洗脱液高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱混合物，所述Ⅲ?C类洗脱液为三尖杉酯碱；在上述洗脱过程汇总，首先洗脱的是Ⅲ?A类：高三尖杉酯碱；中间部分是Ⅲ?B类：高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱的混和物；最后洗脱的是Ⅲ?C类：三尖杉酯碱。[0043] 进一步地，所述步骤S12的四次减压浓缩的步骤中，在浓缩器中进行减压浓缩的温度为55?60℃，真空度为0.03MPA，60℃热测时，浸膏相对密度1.1，在旋转蒸发仪中浓缩的温度为55?60℃。[0044] 进一步地，所述步骤S13的溶解、蒸干及结晶的步骤中，在旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干的温度55?60℃。[0045] 进一步地，所述步骤S14的真空干燥的具体步骤为：真空干燥箱中，真空度0.07MPA，于55?60℃干燥12小时。[0046] 进一步地，所述步骤S15的粉碎及内包装步骤中，粉碎的细粉为200目。[0047] 与现有的技术相比本发明的有益效果是：[0048] 1）针对现有制备高三尖杉酯碱所存在的技术问题，本发明提供了一种高三尖杉酯碱及其工艺生产方法，该高三尖杉酯碱使用中国粗榧的枝叶作为制备原料，制备原料取材的创新解决了现有使用三尖杉根茎及树干作为原料对高三尖杉酯碱进行提取制备而破环珍稀树种资源的技术问题；[0049] 2）通过本发明提供的高三尖杉酯碱工艺生产方法制备得到的高三尖杉酯碱的含量为99%以上，进一步解决了现有制备方法制备得到的高三尖杉酯碱含量及产量较低的问题，且该发明提供的高三尖杉酯碱的工艺生产方法是在不影响树种正常生长、不破坏环境的前提下进行工业化生产。附图说明[0050] 图1为通过该发明制备得到的高三尖杉酯碱样品与高三尖杉酯碱测试样品的红外光谱测试对比图；[0051] 图2为通过该发明制备得到的高三尖杉酯碱样品的检验开云优惠体育网页版入口书。具体实施方式[0052] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本发明进行进一步详细说明。[0053] 实施例1[0054] 一种高三尖杉酯碱，该高三尖杉酯碱是以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成，以中国粗榧的枝叶作为制备原料制备而成的高三尖杉酯碱的含量大于99%。[0055] 上述一种高三尖杉酯碱通过以下工艺生产方法制备而成，具体实施步骤如下：[0056] S1：原材料预处理：将中国粗榧的枝叶按照前处理SOP程序进行处理，拣净杂质得到净料；[0057] S2：粉碎：将步骤S1中得到的净料进行粉碎得粗粉，粉碎的粗粉为10?20目，粉碎速度为70?100kg/小时；[0058] S3：甲醇提。航街鑃2中的三尖杉粗粉自罐顶投料口投入罐内，于罐中加入过量的95%以上的甲醇，对三尖杉粗粉进行甲醇加热回流提。啻沃馗，95%以上甲醇的加入量为三尖杉粗粉的3?5倍，甲醇加热回流提取时的温度为65℃，每次回流时间为2h，重复回流提取时，95%以上甲醇的加入量为三尖杉粗粉的1?2倍，重复提取次数为2?4次；[0059] S4：一次减压浓缩：将步骤S3经多次甲醇回流提取得到的提取液输入列管浓缩器中进行浓缩，得到浸膏，减压浓缩的真空度为：0.06?0.07MPa，温度控制在40?50℃，浓缩至60℃进行热测，浸膏相对密度为1.1。[0060] S5：酸沉：将步骤S4浓缩得到的浸膏倒入酸沉缸中，加入1%HCl水溶液进行酸沉处理，酸沉降完成后，收集上层清液，步骤具体为：加入与浸膏等量的1%HCl水溶液充分搅拌溶解2小时，再加入一定量水，调节PH值至2，静置，沉降24小时以上，将上层清液抽出，下层残渣液用离心机离心，转速400RPM，使上清液与残渣分离，将上清液合并收集于不锈钢桶中，残渣弃去；[0061] S6：萃取、脱色：将步骤S5得到的酸沉上清液置于酸沉罐中，加入石油醚进行萃取、脱色，收集下层酸水液；步骤S6中，所述萃取、脱色具体为:向酸沉罐中加入三分之一的60?90度石油醚，充分搅拌萃取5分钟，静置0.5h，待分层后，抽出上层石油醚层，如此进行几次萃。敝凛腿∫杭负跷奚，将下层酸水液抽入萃取罐中；[0062] S7：萃取酯碱：将步骤S6得到的下层酸水液抽入萃取罐进行酯碱萃。10%的氨水调PH，用氯仿进行萃。腿□ゼ畈街杈咛逦：将步骤S6得到的下层酸水液抽入萃取罐用10%的氨水调至PH=5—5.5，充分搅拌均匀，再加入与酸水液等体积的氯仿充分搅拌萃取5分钟，静置0.5小时，待分层后，放出下层氯仿层，如此进行8—10次重复萃。敝谅确轮形搋ゼ罴斐鑫梗籟0063] S8：二次减压浓缩：将步骤S7萃取后得到的氯仿液进行合并，对合并的氯仿液通过无水硫酸钠干燥柱进行干燥，将干燥后的氯仿液输入浓缩罐中进行减压浓缩，得到高三尖杉总碱浸膏；[0064] S9：柱层析洗脱：对步骤S8得到的高三尖杉总碱浸膏进行柱层析洗脱，根据有效成分及杂质的分类，得到四类洗脱液：Ⅰ类洗脱液、Ⅱ类洗脱液、Ⅲ类洗脱液、Ⅳ类洗脱液，减压浓缩的温度为55?60℃，真空度为0.03MPA，减压浓缩得到的高三尖杉总碱浸膏的相对密度为1.2，柱层析洗脱具体步骤为：[0065] （1）层析柱安装：将柱子固定于架子上，用水平尺齐方向保持垂直，再将剪好的脱脂棉、滤纸放入柱底，压平；[0066] （2）将活度为二级的100?200目的Al2O3用氯仿拌成糊状，再缓缓倒入柱中，边倒边用软物轻轻敲击柱子，使Al2O3装填一致均匀，装完后用氯仿上、下循环1小时，使Al2O3均匀、充实；[0067] （3）样品处理：将高三尖杉总碱浸膏加等量的氯仿搅拌使充分溶解，并拌以等量的三氧化二铝；[0068] （4）上样：将溶解好的样品加入柱中，使拌样表面平整；[0069] （5）洗脱：将计量缸中的氯仿换成氯仿：甲醇=100：0.5，即极性为0.5%，然后开启阀门，加入柱中，进行洗脱；[0070] （6）控制柱下阀门，流速约为1升/分钟，约每5升为收集单位收集，每隔5桶用毛细管取样进行薄层层析，检测高三尖杉酯碱，跟踪、检查、归类，按有效成份和杂质可分为四类，分别为：Ⅰ类洗脱液、Ⅱ类洗脱液、Ⅲ类洗脱液、Ⅳ类洗脱液。所述Ⅰ类洗脱液为前杂，即无有效成份，只有杂质；所述Ⅱ类洗脱液为前交叉，既有有效成份又有杂质；所述Ⅲ类洗脱液为混合酯碱，几乎全部为有效成份；所述Ⅳ类洗脱液为后杂，即无有效成份，只有杂质；[0071] （7）根据检测结果，及时更换洗脱液极性，洗脱液极性梯度为0.5%、1%、2%三种，即洗脱液从Ⅰ类变Ⅱ类时，极性从0.5%→1%；从Ⅱ类变Ⅲ类时，极性从1%→2%。[0072] S10：三次减压浓缩：将步骤S9中得到的分类相同的洗脱液合并，分别进行减压浓缩，最终得到四类浸膏：Ⅰ类浸膏、Ⅱ类浸膏、Ⅲ类浸膏、Ⅳ类浸膏，将Ⅱ类浸膏、Ⅲ类浸膏倒入旋转蒸发仪，进行水浴真空减压浓缩蒸干，得到Ⅱ类干膏、Ⅲ类干膏，减压浓缩的温度为55?60℃，真空度为0.03MPA，减压浓缩至60℃热测时，浸膏的相对密度为1:1即可，所述水浴真空减压浓缩蒸干的温度为55?60℃，时间为0.5?1小时。[0073] S11：分配层析洗脱：将步骤S10得到的Ⅲ类干膏进行分配层析洗脱，对洗脱的不同顺序得到的洗脱液进行分类、合并，分别得到三类洗脱液：Ⅲ?A类洗脱液、Ⅲ?B类洗脱液及Ⅲ?C类洗脱液，分配层析洗脱的具体步骤为：[0074] （1）装柱：将100?160目的硅胶称好，并与等量的PH=5的柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液充分研和均匀，再以氯仿适量搅拌成糊状，装于层析柱中，并用软物敲打柱体，使硅胶均匀，无勾流；[0075] （2）样品处理：将混合酯碱用等量的氯仿溶解；[0076] （3）上样：将样品缓缓加于柱子上端，开启柱下阀门，使其慢慢吸附，至柱上液面与硅胶面平齐；[0077] （4）再用PH=5柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液饱和的氯仿溶液加入柱子上端，进行洗脱，流速为1升/分钟，以3升为计量收集单位，每隔5桶取样进行高三尖杉酯碱检测依据薄层层析鉴别，归类分别合并为三个部分，分别为Ⅲ?A类洗脱液、Ⅲ?B类洗脱液及Ⅲ?C类洗脱液，所述Ⅲ?A类洗脱液为高三尖杉酯碱，I所述Ⅲ?B类洗脱液高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱混合物，所述Ⅲ?C类洗脱液为三尖杉酯碱；在上述洗脱过程汇总，首先洗脱的是Ⅲ?A类：高三尖杉酯碱；中间部分是Ⅲ?B类：高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱的混和物；最后洗脱的是Ⅲ?C类：三尖杉酯碱。[0078] S12：四次减压浓缩：:将步骤S11中得到的经合并的各类别的洗脱液输入浓缩器中分别进行减压浓缩，分别得到相应的Ⅲ?A浸膏、Ⅲ?B浸膏及Ⅲ?C浸膏，将A类浓缩浸膏倒入旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干，得到高三尖杉酯碱精品，在浓缩器中进行减压浓缩的温度为55?60℃，真空度为0.03MPA，60℃热测时，浸膏相对密度1.1，在旋转蒸发仪中浓缩的温度为55?60℃。[0079] S13：溶解、蒸干及结晶:将步骤S12得到的高三尖杉酯碱精品加入丙酮进行溶解，于旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干，加入乙醚，析晶完全后，过滤，抽干收集于烧杯中，得到结晶精品，将得到的结晶精品用少量甲醇溶解，于旋转蒸发仪中进行水浴加热减压蒸发，加入乙醚，析晶完成后，得到高三尖杉酯碱结晶精品，在旋转蒸发仪中进行减压水浴浓缩蒸干的温度55?60℃。[0080] S14：真空干燥：将步骤S13得到的高三尖杉酯碱结晶精品进行真空干燥，得到高三尖杉酯碱干粉，真空干燥的具体步骤为：真空干燥箱中，真空度0.07MPA，于55?60℃干燥12小时。[0081] S15：粉碎及内包装：对经步骤S14真空干燥后的高三尖杉酯碱干粉进行粉碎成细粉，粉碎的细粉为200目，按原料车间内包装岗位的标准操作程序进行包装。[0082] 实施例2[0083] 为进一步验证本发明所提供的高三尖杉酯碱的工艺生产方法的可行性和有效性，以808kg高三尖杉树枝制备生产高三尖杉酯碱为例，具体流程如下：[0084] 1.将808kg高三尖杉树枝按其前处理SOP处理，拣净杂质约得净料804kg；[0085] 2.处理好的原药材装入洁净无毒塑料袋中，贴上物料标签，存于净料暂存间，按生产品种及所用物料码放整齐；[0086] 3.将物料于粉碎机中粉碎成10?20目粗粉，粉碎速度为80kg/小时，约得粗粉800kg；[0087] 4.从净料暂存间领取高三尖杉树枝粗粉；[0088] 5.领取95%以上甲醇3.2T；[0089] 6.将三尖杉粗粉按800kg自罐顶投料口投入罐内，压平，关闭投料口；[0090] 7.加入4倍量的甲醇，并使甲醇液面高出药粉面10cm；[0091] 8.打开蒸汽加热阀加热，使罐内甲醇微沸回流，至罐内溶液温度达65℃时，开始计间，保持回流2小时，关闭加热阀；[0092] 9.打开罐放液阀，将提取液放入暂存罐中，放完后关闭放液阀；[0093] 10.再向提取罐加入2倍量的甲醇，同法提取2h，如此重复提取2次；[0094] 11.将提取液输入列管浓缩器进行浓缩，真空度0.06?0.07MPa，温度控制在40?50℃，浓缩至浸膏相对密度为1.1（60℃热测），用收膏桶收集浸膏，约得浸膏70?75kg，收膏率约2%。[0095] 收膏率=浓缩浸膏量（相对密度1.160℃测）/三尖杉树枝粗粉量*100%[0096] 12.酸沉：[0097] 12.1将浸膏1倒入酸沉缸中，加入与浸膏等量的1%HCl水溶液充分搅拌溶解2小时，再加入一定量水，调节PH值至2，静置，沉降24小时以上；[0098] 12.2将上层清液抽出，下层残渣液用离心机离心，转速400RPM，使上清液与残渣分离，将上清液合并收集于不锈钢桶中，残渣弃去；[0099] 13.萃取[0100] 13.1脱色[0101] 13.1.1将上述酸沉上清液于酸沉罐中，加入三分之一的60?90度石油醚，充分搅拌萃取5分钟，静置0.5h，待分层后，抽出上层石油醚层，如此进行几次萃。敝凛腿∫杭负跷奚。将下层酸水液抽入萃取罐进行萃。籟0102] 13.1.2合并萃取液（石油醚层），将它通过50kg无水硫酸钠干燥柱吸收水份，再将其输入浓缩器进行减压浓缩回收试剂约需0.5小时，温度：55?60℃，真空度：0.03MPA；[0103] 13.2萃取酯碱：将脱色后的酸水液2用10%的氨水调至PH=5—5.5，充分搅拌均匀，再加入与酸水液2等体积的氯仿充分搅拌萃取5分钟，静置0.5小时，待分层后，放出下层氯仿层，如此进行8—10次重复萃。敝谅确轮形搋ゼ罴斐鑫梗籟0104] 13.3萃取完毕后，合并氯仿液，将其通过无水硫酸钠干燥柱干燥，约12小时将干燥后的氯仿液输入浓缩罐中进行减压浓缩至浸膏相对密度为1.2为止，温度：55?60℃，真空度：0.03MPA；[0105] 13.4收膏：浓缩好的浸膏收集于不锈钢桶中，由QA取样，检测含量，称量，入库，约得浸膏2（高三尖杉总碱）6?7kg，并做好记录，提取率约10%。[0106] 提取率=（高三尖杉总碱量*含量）/（三尖杉树枝粗粉样*含量）*100%[0107] 13.5将上述酸水液用10%氨水调节到PH=9时，再用氯仿按4.6.2方法同法萃取至无生物碱检出；[0108] 13.6合并氯仿液，用无水NaSO4干燥12小时，浓缩至浸膏相对密度为1.2（60℃测），温度55?60℃，真空度0.03MPa，再用无水乙醇结晶，重结晶得粗榧碱，称量、入库；[0109] 14.层析[0110] 14.1领料：按生产指令从原料库领取高三尖杉总碱浸膏（浸膏2），约6?7kg；[0111] 14.2层析柱安装：将柱子固定于架子上，用水平尺齐方向保持垂直，再将剪好的脱脂棉、滤纸放入柱底，压平；[0112] 14.3将活度为二级的100?200目Al2O320kg用氯仿拌成糊状，再缓缓倒入柱中，边倒边用软物轻轻敲击柱子，使Al2O3装填一致均匀，装完后用氯仿上、下循环1小时，使Al2O3均匀、充实；[0113] 14.4样品处理：将高三尖杉总碱浸膏1kg加等量的氯仿搅拌使充分溶解，并拌以等量的三氧化二铝；[0114] 14.5上样：将溶解好的样品加入柱中，使拌样表面平整；[0115] 14.6洗脱：将计量缸中的氯仿换成氯仿：甲醇=100：0.5（即极性为0.5%），然后开启阀门，加入柱中，进行洗脱；[0116] 14.7控制柱下阀门，流速约为1升/分钟，约每5升为收集单位收集，每隔5桶用毛细管取样进行薄层层析，检测高三尖杉酯碱，跟踪、检查、归类，按有效成份和杂质可分为四类，分别为：Ⅰ类洗脱液、Ⅱ类洗脱液、Ⅲ类洗脱液、Ⅳ类洗脱液。所述Ⅰ类洗脱液为前杂，即无有效成份，只有杂质；所述Ⅱ类洗脱液为前交叉，既有有效成份又有杂质；所述Ⅲ类洗脱液为混合酯碱，几乎全部为有效成份；所述Ⅳ类洗脱液为后杂，即无有效成份，只有杂质；[0117] 14.8根据检测结果，及时更换洗脱液极性，洗脱液极性梯度为0.5%、1%、2%三种，即洗脱液从Ⅰ类变Ⅱ类时，极性从0.5%→1%;从Ⅱ类变Ⅲ类时，极性从1%→2%；[0118] 14.9将分类相同的洗脱液合并，输入浓缩罐中，减压浓缩至浸膏相对密度为1:1（60℃热测）温度：55?60℃，真空度：0.03MPA，同时进行试剂回收，Ⅰ类、Ⅳ类浸膏弃去，Ⅱ类、Ⅲ类洗脱液浓缩浸膏倒入旋转蒸发仪，55?60℃水浴真空减压浓缩至干，约需0.5小时，分别检测含量，称量贴好物料标签，并作好记录，约得Ⅱ类干膏500g、Ⅲ类干膏525g；[0119] 收率=（C类干膏量×含量）/（高三尖杉总碱量×含量）×100%[0120] 15.分配层析[0121] 15.1领料：按生产指令从中间站领、罄喔呷馍蓟旌硝ゼ罡筛。[0122] 15.2装柱：将20kg的100?160目的硅胶称好，并与等量的PH=5的柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液充分研和均匀，再以氯仿适量搅拌成糊状，装于层析柱中，并用软物敲打柱体，使硅胶均匀，无勾流；[0123] 15.3样品处理：将混合酯碱用等量的氯仿溶解；[0124] 15.4上样：将样品缓缓加于柱子上端，开启柱下阀门，使其慢慢吸附，至柱上液面与硅胶面平齐；[0125] 15.5再用PH=5柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲液饱和的氯仿溶液加入柱子上端，进行洗脱（流速1升/分钟），以3升为计量收集单位，每隔5桶取样进行高三尖杉酯碱检测依据薄层层析鉴别，归类分别合并为三个部分，分别为Ⅲ?A类洗脱液、Ⅲ?B类洗脱液及Ⅲ?C类洗脱液，所述Ⅲ?A类洗脱液为高三尖杉酯碱，I所述Ⅲ?B类洗脱液高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱混合物，所述Ⅲ?C类洗脱液为三尖杉酯碱；在上述洗脱过程汇总，首先洗脱的是Ⅲ?A类：高三尖杉酯碱；中间部分是Ⅲ?B类：高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱的混和物；最后洗脱的是Ⅲ?C类：三尖杉酯碱；[0126] 15.6首先洗脱的是高三尖杉酯碱（I类）；中间部分，是高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱的混和物（II类）；最后洗脱的是三尖杉酯碱（III类）；[0127] 15.7将分类相同的洗脱液合并，输入浓缩器中进行减压浓缩至浸膏相对密度1.1（60℃热测）温度：55?60℃，真空度：0.03MPA，将II类、III类浸膏交库房保存备用。将I类浓缩浸膏倒入旋转蒸发仪中55?60℃减压水浴浓缩蒸干，约需0.5h,约得高三尖杉酯碱精品160?180g，检测，称量，记录，送中间站。[0128] 收率=（高三尖杉酯碱精品×含量）/（III类高三尖杉混合酯碱量×含量）×100%[0129] 16.结晶[0130] 16.1领料：按生产指令从中间站领取高三尖杉酯碱精品；[0131] 16.2结晶：高三尖杉酯碱精品用少量的丙酮溶解。待溶解完毕后，于旋转蒸发仪中55?60℃减压水浴浓缩蒸干，水浴蒸发至丙酮为少量，使液体有挂壁现象为止，取下，加入乙醚，至有微量晶粒出现为止，然后静置过夜，析晶；[0132] 16.3待析晶完全后，用布氏漏斗过滤，抽干收集于烧杯中，结晶精品，再用少量甲醇溶解，待溶解完毕后，于旋转蒸发仪中55?60℃水浴加热减压蒸发，蒸发至甲醇少量时，使溶液有挂壁现象为止，取下，加入乙醚，至有晶核出现为止，静置过夜，析晶；[0133] 16.4按4.9.3方法重复操作几次，进行结晶，重结晶，直至达到外观质量标准（即白色粉末）为止；[0134] 16.5真空干燥：将结晶好的高三尖杉酯碱结晶精品放于不锈钢盘中，置于真空干燥箱中，于55?60℃干燥12小时。真空度0.07MPA，约得高三尖杉酯碱干粉70?80g。并由QA取样检测，合格后方可进入粉碎工序。收率50?60%；[0135] 收率=（高三尖杉酯碱精品×含量）/（高三尖杉酯碱干粉量×含量）×100%[0136] 16.6按结晶岗位清场SOP清。钚瓷锹己颓宄〖锹迹籟0137] 17.粉碎[0138] 17.1经真空干燥后的高三尖杉酯碱干粉，于粉碎机中，粉碎成200目的细粉；[0139] 17.2将粉碎好的细粉装入不锈钢桶中称量，贴上物料标签，交内包工序；[0140] 18.内包装[0141] 18.1领料：按生产指令从库房领内包材；[0142] 18.2按原料车间内包装岗位的标准操作程序进行包装，包装规格：50g/袋；[0143] 18.3工作人员必须先把手进行消毒，后戴好灭菌乳胶手套以50g/袋为单位，先用塑料薄膜包装，再负压抽去多余的空气，封口；[0144] 装袋：按原料车间外包岗位操作，SOP操作，在每个塑料袋外套1个铝箔袋包装，封口。[0145] 试验实施例3[0146] 该实施例将通过该工艺生产方法制备得到的高三尖杉酯碱样品和高三尖杉酯碱标准测试品进行红外光谱图对比，结果如说明书附图1所示，对比结果进一步表明，本发明所提供的一种高三尖杉酯碱的工艺制备方法确实可行，且如说明书附图2所示，利用本发明提供的制备高三尖杉酯碱的工艺方法最终获得的样品中高三尖杉酯碱含量大于99%，极大提高了传统工艺的收率和纯度。[0147] 以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制，应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范。

专利地区：陕西

专利申请日期：2021-07-29

专利公开日期：2024-05-03

专利公告号：CN113651830B