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地区：河南-郑州;
开云优惠体育网页版入口开云优惠体育网页版入口名称：核蛋白H-NS和双组分信号转导系统CpxAR协调调控IncFⅡ质粒接合的分子机制
开云优惠体育网页版入口所有人：河南农业大学
开云优惠体育网页版入口简介：质粒介导耐药基因水平散播是导致细菌耐药基因在菌属间广泛散播的最常见途径。IncFII质粒是多重耐药大肠埃希菌中最常见的接合型质粒，它的接合受H-NS和CpxAR等的调控。本项目在国家自然科学基金面上项目（31772800）支持下，针对养禽业临床多重耐药鸡大肠杆菌日益严重的突出问题，以多重耐药鸡大肠杆菌的IncFII质粒为研究对象，通过构建单、双基因缺失株及回补株、构建不同目标基因启动子的LacZ融合开云优惠体育网页版入口质粒、EMSA和DNase I足迹试验等方法探明了H-NS和CpxAR调控IncFII质粒接合作用的靶基因、调控方式及位点，阐述了其对IncFII质粒接合的互作调控机制。主要取得了如下研究开云优惠体育网页版入口： 1. 解析H-NS和CpxAR调控IncFII质粒接合作用的靶基因、调控方式及位点 项目在成功构建hns和cpxR的单基因缺失株和回补株基础上，经EMSA和DNase I足迹试等发现CpxR和H-NS能分别与IncFII质粒的raY、ttraJ和traM基因上的PY、PJ和PM启动子区进行直接结合，其中CpxR与启动子的结合位点分别为PY：5′-TTACA-N3-TTAAA-3′，PJ：5′-TCAAA-N4-AGAAT-3′和PM：5′-TTTCT-N13-TTTAT-3′；而H-NS与启动子的结合位点有多个，即H-NS蛋白可选择性的与相应启动子区的AT 富集区（AT≥60%）合。继而显著抑制其基因的mRNA相对表达量，其中cpxR缺失可使traJ、traY和traM基因的相对表达量升高7.38倍、2.08倍和1.51倍，而hns缺失可使traJ、traY和traM基因的相对表达量升高448.14倍、1510.14倍和81.54倍。最终抑制IncFII质粒的接合转移，其中cpxR缺失可使IncFII质粒的接合转移率升高14.80倍，而hns缺失可使IncFII质粒的接合转移率升高1279.33倍，即H-NS对IncFII质粒的接合转移的负调控作用更为强大。 2. 揭示了H-NS和CpxAR互作调控IncFII质粒接合的分子机制 研究发现，双基因缺失株FΔcpxRΔhns的接合频率介于两个单缺株FΔcpxR和FΔhns之间，比FΔcpxR显著高7.39倍（P<0.0001）但显著低于FΔhns，且高达11.69倍（P<0.0001）步表明cpxR与hns对IncFII型质粒的调控呈拮抗作用。进一步研究发现，不仅双基因缺失株tra基因的相对表达量介于两单基因缺失株之间，且双基因缺失株LacZ融合开云优惠体育网页版入口菌株的β-半乳糖苷酶活性也介于两者之间，说明CpxAR与H-NS由于在调控tra相关基因启动子PY、PJ、PM 中呈拮抗作用中。EMSA和DNase I足迹试验发现H-NS能竞争性与CpxR-box区结合，即H-NS通过竞争CpxR 在IncFII质粒PM、PJ和PY启动子区的结合位点而拮抗CpxAR对IncFII质粒接合转移的调控作用。 上述研究详细解析了H-NS和CpxAR互作调控多重耐药IncFII质粒接合的分子机制，为临床深入研究控制多重耐药鸡大肠杆菌IncFⅡ质粒介导的多重耐药基因水平快速散播提供理论依据，并为遏制耐药菌在临床的广泛散播提供新思路和新策略。自项目开展至今，共发表学术论文4篇，其中SCI（中科院2区）文1篇，中文核心论文3篇，培养毕业硕士研究生4人。
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