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开云优惠体育网页版入口名称：从蛋白结合型尿毒素中筛选肾小管OATs-MRPs通道功能评价的特异性标志物

开云优惠体育网页版入口完成单位：兰州大学第一医院

开云优惠体育网页版入口完成人：马彦荣;武新安;周燕;张帆;石阿茜;杨玉全;王欢

所属行业：科学研究和技术服务业

开云优惠体育网页版入口登记号：9622022J0114

开云优惠体育网页版入口简介：

①课题来源与背景：国家自然科学基金委，青年基金项目。肾脏是机体重要的排泄器官之一，其排泄过程主要包括肾小球滤过、肾小管分泌和重吸收过程，其中肾小管OATs-MRP4通道在众多药物的分泌过程中起到重要作用。然而，目前仍然缺乏评价该通道分泌能力的标志物。因此，筛选评价OATs-MRP4通道排泄能力的标志物对准确评价该通道药物排泄能力或用药剂量确定/调整至关重要。②研究目的与意义：肾小球滤过和肾小管分泌共同构成了药物及其代谢物的肾脏排泄过程，而应用评估肾小球滤过功能的肌酐作为唯一调整用药剂量的指标无法满足临床药物治疗的需求。目前，临床上缺乏评估肾小管分泌功能的标志物。肾小管上存在着众多转运体组成的矢量转运通道，其中OATs-MRPs通道在有机阴离子药物的肾排泄过程具有重要作用。尽管传统的代谢组学能够筛选出OATs和MRPs的内源性小分子底物（<1kDa），但其往往存在高比例的肾小球滤过率（<50kDa），不能作为评价该通道功能的特异性标志物。课题组初步发现，血浆中一些蛋白结合型尿毒素的浓度变化与肾脏OATs和MRPs的表达水平存在相关性。考虑到蛋白结合型尿毒素既不被肾小球滤过，又属于肾小管转运体的小分子底物。基于此，课题组拟从蛋白结合型尿毒素中筛选OATs-MRPs通道功能评价的特异性标志物，为预测该通道药物的排泄能力提供依据。③主要论点与论据：理想的肾小管OATs-MRPs通道功能评价的标志应具有不被肾小球滤过（>50kDa），且特异性经OATs摄取后经MRPs外排进入尿液的特征。本项目从体内以蛋白结合型的UTs（>50kDa）中筛选肾小管OATs-MRPs通道功能评价的标志物，能够有效避免被肾小球滤过；并结合研究报道和课题组前期研究显示，蛋白结合型UTs主要经肾小管转运体介导排泄，其中OATs和/或MRPs介导了一些蛋白结合型UTs的摄取和/或排泄，表明从蛋白结合型UTs中筛选肾小管OATs-MRPs通道功能评价的特异性标志物是理论可行的。本项目通过1）通过尿毒素数据和文献获得了26种候选化合物，2）通过蛋白结合率和HEK293T-OAT1/-OAT3/-MRP4摄取评价获得了蛋白结合率超过90%，且同时经OAT1、OAT3和MRP4转运的kynurenicacid、CMPF和N-(cinnamoyl)glycine作为候选标志物；3）通过对候选标志物的体外评价、矢量转运评价和体内评价（抑制剂和基因敲除动物）获得了潜在标志物；4）通过不同表达肾小管分泌或重吸收转运体细胞系摄取获得了特异性的潜在标志物kynurenicacid和N-(cinnamoyl)glycine；4）通过终末代谢评价、半衰期测定和亲和常数测定最终获得了OATs-MRP4通道的特异性和适宜性良好的内源性标志物kynurenicacid；5）通过评价kynurenicacid与OATs-MRP4通道底物药物头孢美唑的相关性证实kynurenicacid能够作为评价OATs-MRP4通道底物药物排泄的标志物。本研究筛选获得了OATs-MRP4功能评价的标志物kynurenicacid，为该通道药物排泄评价或用药剂量确定/调整提供了参考依据。④创见与创新：新观点：肾小球滤过和肾小管转运共同构成了药物的肾脏排泄过程，然而，临床肾功能的评价指标主要是用于评估肾小球滤过功能，而缺乏评估肾小管转运能力的标志物。肾小管OATs-MRPs通道在众多有机阴离子药物的肾排泄过程中起到至关重要的作用，但目前并未见有关评价OATs-MRPs通道功能的标志物的报道。基于此，本项目首次提出了筛选肾小管OATs-MRPs矢量转运通道的内源性标志物。为筛选肾小管转运通道功能评价的标志物提供新方法：肾小管OATs-MRPs通道功能评价的标志物应具有少量或不被肾小球滤过（>50kDa）且特异性经该通道转运（<1kDa）的特性。很显然代谢组学技术无法筛得这种化合物，考虑到蛋白结合型化合物不能被肾小球滤过，同时具有转运体底物的特性（经肾小管转运体介导排泄），从而为筛选肾小管转运通道功能评价的内源性标志物提供了新方法和新思路。研究显示，许多尿毒素经肾小管OATs介导摄。闭庑┠蚨舅赜质粲诘鞍捉岷闲。此外，课题组前期研究发现，一些蛋白结合型尿毒素血浆浓度的增加与肾脏OATs和MRPs的表达下调有关。基于此，本项目从蛋白结合型尿毒素中筛选肾小管OATs-MRPs通道功能评价的特异性标志物。⑤社会经济效益，存在的问题：肾脏是机体重要的排泄器官之一，其排泄过程主要包括肾小球滤过、肾小管分泌和重吸收过程，其中肾小管OATs-MRP4通道分泌在药物肾排泄过程中起到重要作用。然而，目前缺乏评价OATs-MRP4通道功能的标志物。本项目通过数据库和文献筛选出候选化合群，通过蛋白结合率评价和过表达细胞摄取和筛选出OATs-MRP4通道的候选标志物；并将候选标志物通过体外体内验证获得潜在标志物；将潜在标志物通过特异性和适应评价后最终获得OATs-MRP4通道功能评价的标志物kynurenicacid。为临床OATs-MPR4通道功能及其介导的药物排泄评价提供能依据，有望纳入临床肾功能评价指标。⑥历年获奖情况：无。