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开云优惠体育网页版入口开云优惠体育网页版入口来源：湖北开云优惠体育网页版入口开云优惠体育网页版入口库;
地区：湖北
开云优惠体育网页版入口名称：基于在线HPLC-BCD技术建立高通量筛选中药先导化合物的方法研究
批准登记号：4642018Y0047
批准登记日期：2018.12.24
主要完成人：丁晓萍、李丹平、李红英、谭静玲、程樱、沈全保、黄丹丹、吕晓君、徐箐
第一完成单位：湖北省药品监督检验研究院
合作单位：推荐单位：湖北省药品监督管理局
开云优惠体育网页版入口类别：应用技术
所属省份：湖北省
开云优惠体育网页版入口简介：1）研究内容
        ①建立各药材的HPLC指纹图谱，运用HPLC-MS建立指纹图谱的MS特征谱。
        ②建立药材的HPLC-DAD-UV、HPLC-DAD-MS-FL的在线分析方法，筛选各药材的有效成分或成分群。
        ③以阳性对照药作为参比，评价药材指纹图谱中各成分的酶抑制活性，与前期研究在线抗氧化活性研究结果进行比较，探讨药材中不同成分的抗氧化活性与酶抑制活性的关联性，明确药材中的主要药效成分。
        2)拟采取的研究方案及实验手段
        ①色谱指纹及成分鉴定：建立两种药材的HPLC-DAD方法和色谱指纹图谱，HPLC-MS对药材中成分结构进行分析，参考前期HPLC-MS研究结果比较不同成分的质谱数据，或采用对照品及通过Masslynx(MarkerlynxXS、BiolynxTargetlynxXS、ChromalynxXS、MetabolynxXS)数据库搜索及推理，初步确定指纹峰的结构。
        ②文献调研乙腈对酶在线生化分析影响较大，一般采用甲醇作为有机相。以甲醇和酸水溶液作为流动相。
        ③以阳性对照药考察在线系统的检测信号及稳定性，采用分流手段使流路中的有机试剂浓度适合柱后的酶在线反应。
        ④考察样品与酶的反应时间，确定HPLC-UV检测器后分流管路的流速，考察在线反应管长度、内径及流速对检测信号的影响，确定最佳反应时间，考察加入酶和基质的量及这些溶液的流速确保能得到较强的信号。
        ⑤考察酶、基质溶液不同浓度对信号强度的影响，建立在线HPLC-DAD-MS-EAD和HPLC-DAD-FL-MS-EAD分析方法分别用于山楂叶和虎杖药材的不同酶药效成分的筛选。
        3)关键技术
        ①在线检测中会遇到有机试剂及酸等HPLC溶液对酶活性的影响，研究将采用分流、在线注入酶反应的缓冲溶液稀释有机试剂，确保检测信号不被影响。
        ②在线分析系统涉及到多级管路及仪器的在线连接，采用不同的内径及长度的PEEK管或者分流装置控制不同连接管路中溶液的流速。此外，化合物与酶反应的时间将影响到检测的灵敏度，反应管的长度需要达到反应时间约为2分钟左右（依据文献报道）。酶反应加温过程将产生气泡会影响检测信号，采用气泡消除装置去除气泡干扰。
        ③酶和基质溶液需要采用高精度HPLC泵或流动注射泵低流速输入，反应管的内径和长度将影响生物化学检测的峰的展宽，需要考察不同内径和长度的反应管。

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