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开云优惠体育网页版入口开云优惠体育网页版入口来源：广东开云优惠体育网页版入口开云优惠体育网页版入口库;
地区：广东
开云优惠体育网页版入口名称：生物活性测定方法在多组分生化药品质量控制中的应用
批准登记号：4642020Y0087
批准登记日期：2021.10.08
主要完成人：梁蔚阳、蒋玉辉、邓锋、焦旭雯、薛巧如、陈宇堃
第一完成单位：广东省药品检验所
合作单位：推荐单位：广东省药品监督管理局
开云优惠体育网页版入口类别：应用技术
所属省份：广东省
开云优惠体育网页版入口简介：本课题来源于国家药典委员会。多组分生化药主要是由动物组织提取的，能调节人体生理和代谢功能，具有一定生物学活性的生物因子。目前绝大多数该类药品质量标准中关于活性或含量测定的方法普遍专属性不强，考察目的不明确。同时我国对多组分生化药注射剂的基本技术要求中关于对质量标准的控制原则明确要求“活性测定是反映产品质量的重要内容，有时比含量测定更具专属性，应尽量将活性测定项目订入质量标准。”建立合理可行的效价或活性测定方法，对于考察该类药品质量水平，加强监管具有重要意义。选取具有代表性的多组分生化药品，包括脑蛋白水解物、小牛血去蛋白提取物、促肝细胞生长素、肝水解肽、转移因子、胸腺肽等系列产品，筛选合适的细胞株并通过药品生物活性的考察对该类药品的有效性指标进行评价。技术路线：选取相关细胞株进行培养→加入药物→细胞产生活性效应→筛选确定敏感细胞→细胞损伤水平、修复水平、活性水平、活性指标设定等方法学考察→方法建立。先后采用了四种方法（钙蛋白酶抑制法、促进细胞生长法、过氧化氢损伤修复法、MPP+损伤修复法）对脑蛋白水解物系列品种进行研究分析。最终选定MPP+损伤修复法作为脑蛋白水解物活性测定的标准方法。现行标准[WS1-（X-013）-2003Z]中根据促肝细胞生长素能够促进人肝癌细胞SMMC-7721细胞的生长增殖来检测药品活力。有研究表明，谷氨酰胺也能够促进SMMC-7721细胞的增殖，试验中我们也发现含有谷氨酰胺的RPMI1640培养液对细胞对照组具有促增殖作用，从而影响供试品的刺激指数，所以在拟定标准中强调了无L-谷氨酰胺的RPMI1640培养基的使用。在无L-谷氨酰胺的培养条件下，SMMC-7721细胞的生长增殖完全依靠促肝细胞生长素，能够充分反映药物本身的活性作用。参考重组人表皮生长因子生物学活性测定法（2010年版中国药典三部附录XH）和注射用促肝细胞生长素活性测定法（国家食品药品监督管理局国家药品标准WS1-（X-013）-2003Z），选择了人星形胶质瘤细胞U251和大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12作为研究对象，以NycomedAustriaGmbH生产的小牛血去蛋白提取物注射液（爱维治，批号10492231）为供试品，观察0.4mg/ml的供试品溶液对两种细胞的增殖情况，发现两种细胞均可促进增殖，考虑到人源细胞更能反应本品的疗效，因此使用U251作为实验对象。通过培养细胞用MTT染色固定后，以630nm为参比，测定570nm处的吸光度。取各组平均吸光度计算，当对照品吸光度>细胞对照吸光度时，试验结果成立。供试品吸光度应不小于对照品吸光度的80%。参考2015年版中国药典四部通则9101“药品质量标准分析方法验证指导原则”、通则9105“中药生物活性测定指导原则”、USP39-NF34<1033>BIOLOGICALASSAYVALIDATION，制定了“多组分生化药体外生物活性测定（基于细胞检定方法）一般方案”，建立了脑蛋白水解物细胞活性测定方法标准和限度，修订了促肝细胞生长素细胞活性测定方法标准，同时探讨了小牛血去蛋白提取物的细胞活性测定方法的可行性。其中，脑蛋白水解物活性测定方法已经作为新增的注射用脑蛋白水解物I、II、III国家质量标准法定方法，促肝细胞生长素活性测定方法已作为注射用促肝细胞生长素和促肝细胞生长素肠溶胶囊质量标准内容整体提交国家药典会等待审核，小牛血去蛋白提取物活性测定方法已用于“小牛血去蛋白提取物系列品种”国家评价性抽验工作中。发表文章4篇，滚动成功申报广东省科学技术厅开云优惠体育网页版入口项目1项。

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